口蹄疫病毒非结构蛋白用于口蹄疫病毒感染及其免疫动物的鉴别诊断

摘要

口蹄疫(Foot-and-mouthdisease，FMD)是一种高度接触性传染病，对国际贸易具有深远的影响，被OIE列为A类传染病之首。FMD控制和消灭策略包括疫苗免疫和屠宰可疑畜群。在免疫接种的群体，大多数动物血清FMDV结构蛋白抗体均为阳性，故一些基于结构蛋白的诊断方法很难确定感染口蹄疫病毒与否。只有将感染动物和隐性带毒动物与疫苗免疫动物加以区分才能为FMD的控制和消灭提供科学的依据。从已经发表的鉴别感染口蹄疫病毒动物和免疫动物的结果来看，3ABC和3AB是比较公认的良好检测用抗原，但也有一些在牛上进行的实验显示，少数的免疫动物体内存在3A抗体，这有可能是在疫苗制备过程中仍有微量3A蛋白残留，也有可能是一些交叉抗原的抗体所致。总之，这会影响基于3ABC或3AB的检测方法的特异性。我们利用筛选到的位于3ABC蛋白3B多肽上的保守的、具有强结合活性的F5表位建立特异性免疫检测方法可能是克服类似问题的一种途径。 用重组DNA技术，以pM18T-3ABC质粒为模板将F5表位(141-190位氨基酸)基因用上游引物1和下游引物扩增得到了目的大小的基因片段(150bp左右)，将F5片段用BglⅡ和HindⅢ双酶切，与经BamHI和HindⅢ双酶切的pET-28a(+)片段连接，转化TG1，依次将6个含F5片段串联，表达质粒命名为pET-28a-F5(+6)，然后在大肠杆菌中进行了表达，将表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质斑点ELISA。结果表明F5(+6)基因主要以可溶形式高效表达，表达产物具有免疫原性。以纯化的表达产物为抗原建立了间接酶联免疫吸附试验F5(+6)-ELISA。用307份阴性血清和30份阳性血清等检测，结果表明，该检测方法的特异性为96％，初步的敏感性(preliminarysensitivity)为100％。证明F5(+6)-ELISA方法可用于口蹄疫的鉴别诊断。对经2次免疫的512份猪血清用F5(+6)-ELISA检测，同时作IHA检测，结果双阳性的为2.0％。 用NS-3AB作为识别抗原建立的ELISA是鉴别注苗和自然感染动物的可靠方法。用已知的阳性牛血清和阴性牛血清致核NS-3AB-ELISA，结果表明其特异性为100％。在上海各奶牛场都用“O”型FMD灭能浓缩苗作2次免疫接种，我们用NS-3AB-ELISA检测了852头奶牛，并作IHA检测。实验结果证明FMD灭能浓缩苗含有NS抗原极微量。

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文摘

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第一部分 文献综述：第一章 口蹄疫的研究进展

第二部分 试验研究：第二章 F5(+6)-ELISA检测方法的建立及猪FMDV抗体的检测

第二部分 试验研究：第三章 NS-3AB-ELISA及正向间接血凝检测牛FMDV抗体

全文小结

致谢