番茄抗TYLCV相关分子标记筛选及其分子标记辅助选择抗性聚合研究

摘要

番茄黄化曲叶病(Tomatoyellow leaf curl disease)已经成为世界番茄生产上的主要病害之一，近几年，在我国迅速传播，严重威胁到我国的番茄生产。该病由双生病毒科菜豆金色花叶病毒属番茄黄化曲叶病毒(Tomatoyellow leaf curl virus，TYLCV)引起，主要通过烟粉虱(Bemisia tabaci)。培育抗病品种是阻止该病蔓延的最根本有效的途径，据报道，番茄栽培种种质资源中缺乏抗TYLCV的基因，仅有一些表现为耐病的种质。高抗TYLCV的基因都存在于近缘野生种质中，目前已报道的抗番茄黄化曲叶病的近缘野生种主要有醋栗番茄(S.pimpinellifolium)、秘鲁番茄(S.peruvianum)、多毛番茄(S.habrochaites)、智利番茄(S.chilense)和契斯曼尼番茄(S.cheesmanii)。因此，TYLCV的抗性育种很大程度上基于从野生种向栽培种中转入抗性基因。
　　 本研究以抗病亲本CLN2777A和感病亲本TMXA48-4-0及其F2分离群体为材料，应用AFLP和SSR两种标记技术以及BSA法进行与抗TYLCV基因连锁标记的筛选.同时利用国外开发的分别与抗TYLCV基因Ty-1，Ty-2，Ty-3连锁的标记进行分子标记辅助选择聚合研究，研究结果如下：⑴通过对亲本及F2分离群体进行TYLCV接种，发现F2代抗感病分离比率接近3:1，表明抗性受单个显性基因控制。用512对MseⅠ/PstⅠ引物组合对亲本及F2代抗感基因池进行AFLP分析，最终引物组合P15/M28与P16/M10在亲本及抗感组间表现多态性，回收并克隆测序，两片段大小分别为106bp，180bp，分别命名为P15M28-106，P16M10-180。重新设计引物，将P15M28-106成功转化为CAPS标记，命名为P15M28。应用一个F2群体对其进行验证，遗传连锁分析结果表明标记P15M28与抗性基因Ty-2之间的遗传距离为8.8cM，可以应用于标记辅助选择育种。除此之外，根据Kenta Shirasawa(2010)构建的番茄遗传图谱，选取11号染色体末端，TG36到TG393区间上的7个SSR标记，应用同样的亲本和F2群体进行筛选，发现一个与抗TYLCV连锁的EST-SSR标记TES0344，与抗性基因遗传距离为7.8 cM。⑵应用分别含有Ty-1，Ty-2，Ty-3三个抗TYLCV基因的育种材料TY52，CLN2777A，99S-C-39-20-1-1-24-17-0-0，以及三个园艺性状优良的感病材料Tmm9060-0，TMXA48-4-0，TA1218，按计划配置杂交组合，每一代都应用对应的标记进行分子标记进行筛选，目前已得到Ty-1与Ty-2，Ty-1与Ty-3，Ty-2与Ty-3两两聚合的纯合抗病材料各一株系。