AFB1、OTA、DON高效液相色谱检测方法的优化和应用

摘要

真菌毒素是真菌在生长过程中产生的次级代谢产物，对人和动物都有害。真菌毒素会通过被污染的谷物、饲料和由这些饲料喂养的动物所提供的动物性食品进入我们的食物链，从而对人畜表现出致癌性、遗传毒性、致畸性，不仅影响动物的生长、生产，同时对人类也产生巨大的危害。但是，真菌毒素的产生是不能完全避免的，因此准确的检测真菌毒素的含量，对于进一步对真菌毒素进行降毒、去毒研究显得尤为重要。黄曲霉毒素，被世界卫生组织(WHO)癌症研究机构划分为1类致癌物，是一种毒性极强的物质。脱氧雪腐镰刀菌烯醇，是一种全球性的谷物污染物，对谷物的污染率和污染水平较其他镰刀菌毒素高，居首位。赭曲霉毒素A对动物有很强的肝肾毒性，容易积累在畜禽体内，在畜禽体内性质稳定，不易代谢和降解，从而通过食物链对人类产生危害。OTA在世界范围造成的经济损失仅次于黄曲霉毒素。
　　 本论文主要研究黄曲霉毒素B1(AFB1)，脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和赭曲霉毒素A(OTA)的高效液相色谱检测方法的优化和应用。为高效、快速、准确的检测AFB1、DON、OTA提供技术支持。
　　 试验一AFB1高效液相色谱检测方法的优化
　　 优化了高效液相色谱定量检测饲料中AFB1的方法。优选确定了甲醇∶水(体积70∶30)为最佳提取溶液，优选确定了色谱条件:流动相为乙腈∶水（体积30∶70），检测波长（激发波长Ex=365 nm，发射波长Em=418 nm）。饲料样品通过免疫亲和柱除杂质，HPLC定量分析，加标回收率高达85～99％，检测限为1.7 ng(·)mL-1，定量限为5.67μg(·)kg-1，相对标准偏差(RSD)低于3.50％。
　　 试验二 DON高效液相色谱检测方法的优化
　　 优化了高效液相色谱定量检测饲料中DON的方法。优选确定了超纯水为最佳提取溶液，优选确定了色谱条件:流动相为乙腈∶水（体积分数;15∶85），紫外检测波长218nm。饲料样品通过免疫亲和柱除杂质，HPLC定量分析，加标回收率高达82～95％，检测限为27 ng(·)mL-1，定量限为90.0μg(·)kg-1，相对标准偏差(RSD)低于3.68％。
　　 试验三OTA高效液相色谱检测方法的优化
　　 优化了OTA的高效液相色谱检测方法。优选了提取溶液为乙腈∶水（体积60∶40），优选确立的色谱检测条件为:流动相是乙腈∶水∶醋酸(体积比)=50∶48∶2，激发波长(Ex)是333 nm，发射波长是(Em)是460 nm。饲料样品采用OTA免疫亲和柱净化，HPLC定量分析，加标回收率可达85～96％,检测限是0.038 ng·mL-1，定量限为0.127μg·kg-1，相对标准偏差(RSD)低于3.61％。
　　 实验四饲料中AFB1、DON、OTA污染调查
　　 试验使用优化的高效液相检测方法，检测了来自全国17个省送检的共270份饲料原料和包括配合饲料、浓缩饲料、预混饲料在内的300份饲料中AFB1、DON、OTA的含量，结果显示:总体来看，AFB1、DON、OTA的检出率都处于一个较高水平，其中DON的污染情况严重，超标率高，AFB1和OTA污染情况较DON低，超标率低。通过饲料检测验证，试验优化的高效液相色谱检测方法重复性好，具有较好的准确性和精密度，能够应用于饲料卫生检验。

目录

声明

摘要

符号及缩略语

第一篇 文献综述

第一章 文献综述

1 真菌毒素概述

2 几种常见毒素的国内外限量标准

3 毒素检测技术研究进展

参考文献

第二篇 试验研究

第二章 AFB1高效液相色谱检测方法的优化

1 试验材料与方法

2 结果

3 讨论与结论

第三章 DON高效液相色谱检测方法的优化

1 试验材料与方法

2 结果

3 讨论与结论

第四章 OTA高效液相色谱检测方法的优化

1 试验材料与方法

2 结果

3 讨论与结论

第五章 饲料中AFB1、DON、OTA污染调查

1 试验材料与方法

2 真菌毒素污染程度判定标准

3 结果

4 讨论与结论

参考文献

全文总结

致谢