我国部分地区活禽交易市场H9N2亚型禽流感病毒流行病学调查

摘要

H9N2亚型禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）自1994年在我国首次分离以来，流行范围已扩大至全国各地。该病毒在我国家禽中感染率极高、分布广泛，家禽感染该病毒后，容易造成其他病原继发感染，从而引起家禽呼吸系统疾病和蛋鸡产蛋量下降。H9N2亚型AIV也可以感染人和其他哺乳动物，还可以作为高致病性禽流感病毒的基因供体与其重组，对家禽或公共卫生安全构成严重的威胁。因此，对其进行流行病学调查研究，可以揭示其流行状况和流行规律，从而有助于制定科学的防控策略和应对措施。
　　本研究于2014年4月、8月和10月，在上海、江苏、安徽和广东4省市（长三角和珠三角），随机选取58个活禽交易市场（含25个批发市场和33零售市场），共采集12635份家禽拭子样品。样品采集后进行AIV分离、病毒HA和NA基因RT-PCR检测、序列测定和遗传进化分析。
　　结果显示，所检测的12635份样品中，H9N2亚型AIV样品总体阳性率为15.10％(1908/12635)，H9N2亚型AIV场点阳性率为98.28％(57/58)。该病毒在鸡、鸭、鹅和鸽的样品中的阳性率分别为22.98％(1730/7529)、3.62％(94/2594)、4.08％(67/1643)、2.09％(18/861);该病毒在上海、江苏、安徽和广东四省市的样品中的阳性率分别为24.11％(688/2853)、8.43％(284/3368)、15.27％(475/3110)、13.95％(461/3304)。研究结果还显示，随着家禽在活禽批发市场内停留时间增加，H9N2亚型AIV分离率呈上升趋势（从停留8h内的感染率11.45％，上升到停留48 h以上的感染率29.13％），且H9N2亚型AIV病毒在活禽零售市场感染率(34.40％)显著高于活禽批发市场感染率(12.24％)。遗传进化分析结果表明，检出的H9N2亚型AIV全部属于h9.4.2.5分支，该分支的毒株为2007年以来我国H9亚型AIV优势流行分支。
　　从上述结果可以得出以下推论。首先，H9N2亚型AIV在我国长三角和珠三角活禽市场中感染率很高（鸡群中感染率尤高）;其次，随着活禽在活禽批发市场内停留时间的延长，以及活禽从批发市场向零售市场的转移，H9N2亚型AIV存在一个显著扩增和扩散的过程，这进而提示活禽交易市场在该病毒传播的过程中，可能发挥类似“放大器”的作用，从而有助于该病毒与其他AIV发生基因重配，同时有助于该病毒感染人类。
　　本文通过对长三角和珠三角活禽交易市场H9N2亚型AIV进行流行病学调查，揭示该病毒在这两大区域活禽市场内的流行状况和动态分布关系，为活禽养殖业更好的发展以及更加科学的研判该病毒的流行动态和流行风险，更有针对性地指导防控工作，提供科学的理论依据。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 禽流感病毒的基本特征

1 病原学

2 病毒编码蛋白及其功能

2．1 核糖核酸依赖的对蛆聚合酶(RdRp)

2．2 血凝素(HA)

2．3 核蛋白(NP)

2．4 神经氨酸酶(NA)

2．5 基质蛋白(M)

2．6 非结构蛋白(NS)

3 理化特性

4 感染复制机制

5 遗传变异特点

参考文献

第二章 H9N2亚型禽流感病毒流行病学概述

1 传染源

2 易感动物

3 传播途径

4 流行特征

5 H9N2亚型禽流感病毒的流行情况

6 猪在H9N2亚型禽流感病毒传播中的作用

7 活禽市场与H9N2亚型禽流感病毒的关系

8 致病力

9 预防和控制

10 目的及意义

参考文献

第三章 我国部分地区活禽交易市场H9N2亚型禽流感病毒流行病学调查

1 材料与方法

1．1 样品的采集和处理

1．2 主要试剂与仪器

1．3 PCR引物设计

1．4 病毒的扩增

1．5 核酸提取

1．6 病毒的RT-PCR检测

1．7 实时毛细管电泳检测

1．8 基因测序及分型

1．9 数据统计分析

2 结果及分析

2．1 RT-PCR检测

2．2 H9N2亚型禽流感病毒样品总阳性率

2．3 H9N2亚型禽流感病毒分离率与宿主的关系

2．4 H9N2亚型禽流感病毒分离率与区域的关系

2．5 H9N2亚型禽流感病毒分离率与批发市场内家禽停留时间的关系

2．6 H9N2亚型禽流感病毒分离率在批发市场和零售市场的差异

3 讨论

参考文献

第四章 我国部分地区活禽交易市场H9N2亚型禽流感病毒HA基因谱系分析

1 材料与方法

1．1 样品的采集与处理

1．2 主要试剂和仪器

1．3 PCR引物设计

1．4 病毒扩增

1．5 核算提取

1．6 病毒RT-RCR检测

1．7 实时毛细管电泳检测

1．8 核苷酸序列测定及分析

1．9 分离毒株的基因谱系分析

2 结果及分析

2．1 RT-PCR检测

2．2 基因测序及分析处理

3 讨论

参考文献

全文总结

附录

致谢