奥曲肽和胸腺五肽固相合成工艺的改进——Fmoc--Boc策略组合以及微波辅助合成

摘要

奥曲肽是人工合成的生长抑素八肽类似物，其作用效果比天然生长抑素强，半衰期也较长，具有抑制生长激素、胰岛素、胰高血糖素、胃酸分泌的功能，在临床上有着广泛的应用；胸腺五肽是胸腺生成素Ⅱ第32～36位的氨基酸残基片段，具有胸腺生成素Ⅱ的所有功能，广泛应用于治疗肿瘤、肝病、皮肤病等。
　　 本文利用Fmoc-Boc组合策略以及微波辅助合成技术改进了奥曲肽和胸腺五肽的生产工艺，通过实验和理论分析得到了以下主要结果：
　　 1)以Boc-D-Phe-OH替代Fmoc-D-Phe-OH合成奥曲肽，简化了合成工艺，粗肽中奥曲肽的含量由85％提高到了91％，产率由51％提高到了59％。
　　 2)以Boc-Arg(Pbf)-OH替代Fmoc-Arg(Pbf)-OH合成胸腺五肽，减少了一步脱保护反应和一步洗涤操作，简化了合成工艺，胸腺五肽粗品含量由86％上升为92％，产率由91％上升到95％。
　　 3)分别在微波作用以及传统加热两种方式下，研究了Fmoc-Val-OH与NH2-Tyr-(tBu)-Wang树脂的固相缩合反应及其动力学。获得了Fmoc-Val-OH与NH2-Tyr-(tBu)-Wang树脂在两种方式下的宏观动力学参数：300 W微波作用下表观缩合反应级数为2.3，活化能为104.7 kJ/mol；传统方法中表观反应级数为2.9，活化能为142.4 kJ/mol。
　　 4)采用微波辅助Fmoc-Thr(tBu)-ol与CTC树脂的连接，反应条件为：Fmoc-Thr(tBu)-ol：DIEA：CTC Resin=4:8:1(n：n：n)；以DCM/DMF=5/3(V/V)为反应溶剂，300 W微波辐射下，35℃反应5 min，最终连接效率可以达到58％。与文献报道的31.8％的产率相比，反应时间缩短为5 min，连接效率提高至58％。
　　 5)采用微波辅助切割胸腺五肽树脂，最佳反应条件为：以TFA/TIS/H2O=95/2.5/2.5(V/V/V)为切割试剂，50℃下反应5 min。而胸腺五肽的产率提高到93.2％。