靶向毁损触液核对切口痛大鼠不同时间点痛行为及脑脊液ENK含量的影响

摘要

目的：通过创新应用霍乱毒素亚单位B一皂草素交联复合物(CB-SAP)靶向毁损触液核神经元技术、特异性地毁损触液核，建立缺失触液核的动物模型，考察触液核对切口痛大鼠行为及其脑脊液中ENK含量的影响，为触液核经脑一脑脊液环路及ENK参与痛觉调制提供形态与物质依据。
　　方法：1.缺失触液核动物模型的建立雄性SD大鼠(250±50g)，随机分为CB-SAP组:(侧脑室注射靶向毁损剂CB-SAP，500ng/3ul); CB组:(侧脑室注射毁损剂耦合载体，也是触液核神经元特异性标记物CB，500ng/3ul); CB-SAP组又分为毁损1、3、5、7、10天等5个亚组。CB组于注射后1天处死大鼠，CB-SAP组分别于注射后1、3、5、7、10天处死大鼠，取触液核所在段脑组织，冰冻切片，应用免疫荧光化学标记技术与激光共聚焦显微镜技术相结合，观察术后触液核内CB阳性神经元，即触液核神经元残留情况。Image-Pro Plus6.0图像软件比较各时间点的毁损率，以确认触液核被完全毁损的时间点，建立缺失触液核的动物模型。
　　2.缺失触液核切口痛大鼠痛行为的检测雄性SD大鼠，随机分为CB-SAP组和PBS组。CB-SAP组按1相同方法侧脑室注射靶向毁损剂CB-SAP;PBS组用PBS(CB-SAP的溶媒)代替CB-SAP侧脑室注射。参照1的实验结果，以触液核被完全毁损的时间点作为大鼠痛行为的观测起点。于此时间点，按Brennan法[1]进一步施加切口痛刺激，检测两组大鼠切口痛术前及术后4、8、16、24小时的机械缩足阈值(Mechanical withdraw threshold,MWT)。
　　3.缺失触液核切口痛大鼠脑脊液中ENK检测雄性SD大鼠，随机分为CB-SAP组和PBS组，每组又分为术前及术后4、8、16、24小时等五个亚组。CB-SAP组和PBS组的处理同方法2，抽取两组大鼠切口痛术前及术后4、8、16、24小时的脑脊液，用ELISA法检测脑脊液中ENK的含量。
　　结果：1.缺失触液核动物模型的确立
　　CB组:触液核CB阳性神经元恒定出现在脑干的特定节段，高度集中，计数恒定:277±14。CB-SAP组:侧脑室引入CB-SAP后第1天，大部分触液核CB阳性神经元轮廓基本清晰，但少量CB阳性神经元胞体和胞核体积缩小，触液核CB阳性神经元计数为242±11，与CB组相比，约88％的CB阳性神经元残留，差异统计学意义(P＜0.05);随着天数的增加，触液核CB阳性神经元缺失量越来越多;第7天未观测到完整的CB阳性神经元，全部的触液核CB阳性神经元缺失，差异有统计学意义(P＜0.01);第10天，仍未观测到CB阳性神经元。
　　术前:CB-SAP组大鼠的MWT/TWL基础值为14.22±3.83g/10.33±0.79s，低于PBS组的21.31±3.23g/15.35±0.75s(P＜0.01)。
　　术后:CB-SAP组术后4、8、16、24小时的MWT/TWL值（4.12±1.26g/3.71±0.82s，5.37±1.48g/4.18±0.59s，6.77±1.41g/5.77±0.72s，6.77±1.64g/6.19±0.74s）均低于PBS组（7.63±1.40g/5.17±1.01s,9.95±1.83/9.36±1.34s,10.30±2.19g/10.10±1.21s,11.30±1.76g/11.05±0.88s），差异有统计学意义(P＜0.05或0.01)。PBS组的MWT/TWL值在术后4小时降至最低值，然后逐渐恢复，与术后4小时相比，术后8、16、24小时的的MWT/TWL值，均出现显著增高，差异有统计学意义(P＜0.01); CB-SAP组的MWT/TWL值在术后4小时降至最低值，但与术后4小时相比，术后8小时的MWT/TW值未出现显著性升高(P＞0.05)，至术后16、24小时才出现显著性增高(P＜0.05或0.01)。
　　3.缺失触液核切口痛大鼠脑脊液EN含量的改变
　　术前CB-SAP组的ENK含量的基础值为218.54±15.57 pg/ml，低于PBS组的256.99±16.16pg/ml(P＜0.01)。术后PBS组和CB-SAP组大鼠脑脊液中ENK的含量都在术后4小时达到峰值，术后24小时达最低。术后4、8、16、24小时，CB-SAP组的ENK含量为分别为253.58±23.08pg/ml，242.55±19.73pg/ml，189.61±16.16pg/ml，108.22±10.65pg/ml低于CB组的291.53±24.70 pg/ml，273.51±21.82 pg/ml，210.82±16.89 pg/ml，149.18±10.3 pg/ml差异有统计学意义(P＜0.05或0.01)。
　　结论：1.侧脑室引入CB-SAP后，随着时间的推移触液核毁损程度逐渐增高，至第7天触液核被完全毁损，此时间点为缺失触液核动物模型建立成功的时间点。2.触液核缺失大鼠的MWT/TWL在术前及切口痛术后均显著性降低，提示触液核在生理状态下及急性术后痛过程中均参与了痛觉调制，且主要发挥痛觉抑制作用。3.触液核缺失大鼠脑脊液中ENK含量在术前及切口术后均显著性降低，提示触液可提高脑脊液中ENK的含量，并可能介由ENK通过脑（神经）—脑脊液（体液）途径参与了急性术后痛的调节。

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摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

疼痛矩阵对疼痛的调控作用 综述

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

致谢

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