hBMP2基因转染骨髓基质干细胞与藻酸钙凝胶复合物对骨牵张区成骨作用的研究

摘要

目的:探讨骨形态发生蛋白2(human bone morphogenetic protein2,hBMP2)基因转染的兔骨髓基质干细胞(bone malTow stromal cells,MSC)与藻酸钙凝胶的生物相容性及其应用于牵张成骨区的骨生成情况，为骨组织工程中骨缺损的修复寻找一种新的方法。 方法:抽取成兔髂骨骨髓组织，置于含10﹪胎牛血清的低糖DMEM培养基中培养，用脂质体介导的方法将质粒pCDNA3-hBMP2导入体外培养的MSC中，免疫细胞化学检测转染后hBMP2基因在细胞中的表达情况。将G418筛选获得的阳性克隆继续扩增培养，与藻酸钙凝胶复合作为实验组，对照组为单纯转染的细胞，不同时间用倒置相差显微镜和扫描电镜观察，MTT法进行细胞增殖测定，用碱性磷酸酶进行定量检测，用台盼蓝染色进行活力检查。后将此复合物注入牵张期末的牵张成骨区。4周后观察骨生成情况。对照组为未转染的细胞凝胶复合物。 结果:免疫细胞化学证实基因转染成功，转染后培养72小时和4周MSC中可见棕黄色颗粒，均匀分布于细胞浆中，深浅不一。转染的MSC体外培养时复合或不复合藻酸钙凝胶均生长良好，藻酸钙利于细胞的贴附、生长与增殖，并对细胞的功能无不良影响。扫描电镜示细胞在材料中形态饱满，均匀分布，MTT和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性定量检测均未发现有统计学差异，台盼蓝染色未见蓝染细胞。动物实验x线示实验组较对照组骨痂密度深。 结论:hBMP2基因转染的MSC能够获得瞬时表达和稳定表达，是一种新型的种子细胞：藻酸钙凝胶是较理想的骨组织工程支架材料，基因转染的MSC复合藻酸钙凝胶用于骨缺损的修复，具有广阔的临床应用前景。

目录

文摘

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前 言

文献综述

一　材料与方法

1、实验材料

2、实验方法

2.1骨髓基质干细胞的培养、鉴定与hBMP2基因转染

2.2细胞与材料的复合及生物相容性

2.3MSC及藻酸钙凝胶复合物在骨牵张区的应用

三 结果

3.1骨髓基质干细胞的培养、鉴定与hBMP2基因转染

3.2细胞与材料的复合及生物相容性

3.3MSC及藻酸钙凝胶复合物在骨牵张区的应用

三 讨论

四 结论

参考文献

作者简介

致 谢