胰岛内胰腺星状细胞的分离鉴定及其对胰岛β细胞的影响

摘要

目的：既往研究证实，胰腺星状细胞（pancreatic stellate cell，PSC）可分泌多种细胞因子参与胰腺纤维化及细胞凋亡过程。本实验旨在研究PSC是否存在于胰岛中及其对胰岛β细胞的影响。
　　 方法：1.以密度梯度离心法分离培养大鼠胰岛，并运用外向生长技术及胰酶消化法从胰岛中分离PSCs，分别以相差及荧光显微镜观察其形态及自发荧光水平，并以免疫组化法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表达。2.运用密度梯度离心法分离大鼠原代PSCs。构建胰岛β细胞株Ins-1/胰岛与PSCs共培养系统，并分别以28mmol/L葡萄糖和（或）10IU/ml胰岛素干预不同组别，以Annexin V-PI标记后行流式细胞术分析，检测Ins-1凋亡水平；以MTT法（3-（4，5-methylthiazol-2-y1）-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT）检测Ins-1增殖水平（以吸光度值（Optical Densities，ODs）评估）；DAPI（4，6-diamidino-2-phenylindole，dihydrochloride，DAPI）核染法观察Ins-1细胞凋亡形态；并以电化学发光免疫分析法（electrochemiluminescent immunoassay，ECUA）检测胰岛培养上清中C肽含量。
　　 结果：1.在荧光显微镜下观察，可见胰岛中存在自发荧光阳性细胞；培养14天后胰岛周边出现星形细胞，α-SMA特异性染色呈阳性。2.Ins-1与PSCs共培养后，其凋亡率较单独培养的Ins-1组明显增加（5.03±0.40％vs3.73±0.35％，P<0.05），OD明显下降（1.29±0.17vs2.85±0.31，P<0.05），胰岛与PSCs共培养后上清中C肽分泌量较单独培养的胰岛组明显减少（0.187±0.017 vs0.228±0.026 ng/ml，P<0.05）。3.单独培养的Ins-1/胰岛中，高糖组与空白组相比，Ins-1凋亡率明显增加（7.93±0.40％vs3.73±0.35％，P<0.05），OD明显下降（2.29±0.13 vs2.85±0.31.P<0.05），胰岛C肽分泌量明显减少（0.182±0.009 vs0.228±0.026 ng/ml，P<0.05）；高胰岛素组与空白组相比，Ins-1 OD明显下降（1.68±0.21 vs2.85±0.31，P<0.05），胰岛C肽分泌量明显增加（0.334±0.026 vs0.228±0.026 ng/ml，P<0.05）。4.Ins-1/胰岛和PSCs共培养组与单独培养的Ins-l/胰岛组相比，高糖、高胰岛素、高糖+高胰岛素干预后，Ins-1凋亡率均明显增加（11.73±1.21％vs7.93±0.40％，4.90±0.60％vs3.07±0.31％，10.30±1.00％vs6.53±0.50％，P<0.05），ODs均明显下降（0.62±0.07 vs2.29±0.13，0.29±0.04 vs1.68±0.21，0.14±0.04 vs0.59±0.08，P<0.05），胰岛C肽分泌量均明显减少（0.145±0，008 vs0.182±0.009 ng/ml，0.284±0.024 vs0.334±0.026 ng/ml，0.234±0.017vs0.287±0.009 ng/ml，P<0.05），并可在共培养组中观察到更为典型的Ins-1细胞凋亡形态学变化。
　　 结论：1.PSC存在于胰岛中，分离培养过程中可由静止状态转化为活化状态。2.PSC可促进胰岛β细胞凋亡，抑制其增殖及胰岛素分泌。3.高糖可促进胰岛β细胞凋亡，抑制其增殖及胰岛素分泌。4.高糖环境下；PSC的存在可进一步促进胰岛β细胞凋亡，抑制其增殖及胰岛素分泌，参与胰岛β细胞量的减少及功能障碍进程。

目录

文摘

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主要缩略词表

绪论

文献综述

材料和方法

1.材料

2.实验方法

3.统计方法

结果

讨论

结论

参考文献

致谢

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