肺常规树突状细胞介导的免疫反应在急性肺损伤中的作用研究

摘要

第一部分脂多糖诱导急性肺损伤小鼠肺、血和脾常规树突状细胞动态变化及与肺损伤关系研究
　　 目的：探讨脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠肺、血和脾脏常规树突状细胞(cDC)动态分布规律及肺cDC与肺部炎症损伤关系。方法C57BL/6小鼠36只，随机分为2组:①对照组(Con):小鼠气管内注射PBS30μl;②ALI组(ALI):气管内注射LPS(2mg/kg)。分别在LPS或PBS注射6h、12h和24h处死。光镜观察肺组织病理改变，测定肺损伤评分，计算肺湿重/体重比(LW/BW)，酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织匀浆中白细胞介素(IL)-6的含量，以反映肺组织炎症损伤程度。流式细胞术(FCM)测定肺、外周血和脾单细胞悬液中cDC比例及功能状态。结果ALI组小鼠6h、12h和24h肺LW/BW均明显高于对照组(P＜0.05)。病理检测示ALI组小鼠肺泡间隔增宽、充血、出血及大量炎性细胞浸润等急性肺损伤病理改变。ALI组肺损伤评分及肺组织IL-6水平均显著高于对照组(P＜0.05)。FCM检测显示ALI组小鼠早期(6h)肺组织cDC即快速聚集，24h达到(2.86±0.55)％，均明显高于对照组(P＜0.05)。与对照组外周血cDC相比，ALI组6h外周血cDC明显减少至(0.32±0.10)％，12h恢复至基线水平，24h显著升高至(2.20±0.42)％(P＜0.05vsCon)。ALI组小鼠脾脏cDC呈一过性升高，ALI组12h脾脏cDC升高至(1.92±0.25)％(P＜0.05vsCon)，24h降至基线水平(0.96±0.21)％。在各观察时间点，ALI组表达CD80的肺cDC显著增加(P＜0.05vsCon)，表达MHCⅡ的cDC呈升高趋势，但未达到显著差异(P＞0.05);ALI组小鼠12h表达MHCⅡ的外周血cDC增加(P＜0.05vsCon);与对照组相比，ALI组脾脏表达CD80的cDC显著增加(P＜0.05vsCon)，但表达MHCⅡ无显著差异(P＞0.05)。相关分析显示，在各观察时间点，ALI组肺组织cDC和表达CD80的肺cDC与肺组织中IL-6呈显著正相关，ALI组6h和12h表达MHCⅡ的肺cDC与肺组织中IL-6呈弱正相关关系。结论ALI早期肺、循环和脾脏cDC存在不同的动态规律性变化。肺cDC数量及功能状态与肺炎症损伤存在密切关系，肺cDC可能介导ALI病程中免疫炎症激活过程。
　　 第二部分急性肺损伤防治新途径:氯沙坦抑制肺常规树突状细胞成熟和Th1及Th17型效应
　　 目的：探讨氯沙坦对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠肺部炎症的保护性效应及对肺常规树突状细胞(cDC)功能状态、辅助性T细胞(Th)免疫效应的影响。方法C57BL/6小鼠随机分为:①对照组(Con):气管内注射与LPS等体积的PBS，气管内注射PBS前30min，予以腹腔内注射等体积PBS;②ALI组(ALI):气管内注射LPS2mg/kg复制ALI模型，气管内注射LPS前30min，予以腹腔内注射等体积PBS;③ALI+氯沙坦组(Los):气管内注射LPS2mg/kg前30min，予以腹腔内注射氯沙坦15mg/kg。分别在LPS或PBS注射6、24和48h处死。光镜观察肺组织病理改变，计算肺损伤评分并测定肺组织肺湿/体重比(LW/BW)。流式细胞术(FCM)测定肺单细胞悬液中cDC比例及功能状态。酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织匀浆中白细胞介素(IL)-6的含量反映肺组织炎症损伤程度。实时定量逆转录-聚合酶链反应(RealtimeRT-PCR)检测肺组织T-bet、GATA-3和RORγtmRNA表达水平，ELISA测定肺组织中IFN-γ、IL-4和IL-17的含量反映肺组织Th平衡状态。结果ALI组小鼠24h和48h肺LW/BW明显高于对照组相应时间点肺LW/BW(P＜0.05)。应用氯沙坦(ALI+氯沙坦组)可使肺组织LW/BW较ALI组明显下降，但仍显著高于对照组水平(P＜0.05)。LPS诱导ALI肺组织病理检查见肺泡间隔增宽、肺泡间质内血管充血、出血及大量炎细胞渗出，应用氯沙坦使ALI小鼠肺组织病理损伤明显减轻，肺损伤评分显著降低(P＜0.05)。ALI组24h和48h肺组织IL-6明显高于对照组，应用氯沙坦组可使ALI小鼠肺组织IL-6水平明显下降，但仍明显高于对照组(P＜0.05)。ALI组6h肺组织cDC比例显著升高，表达CD80的肺cDC明显增加，ALI+氯沙坦组表达CD80的肺cDC较ALI组明显下降，但仍显著高于对照组水平;ALI组和氯沙坦组表达MHCⅡ的cDC无明显差异(P＞0.05)。LPS刺激可导致小鼠肺T-bet和RORγtmRNA表达水平明显升高，且IFN-γ、IL-4和IL-17的含量显著升高。应用氯沙坦可使肺组织中T-bet和RORγtmRNA表达明显下降(P＜0.05)，IFN-γ和IL-17的含量明显降低，但对IL-4水平无明显影响(P＞0.05)。结论ALI时，肺大量成熟cDC聚集和Th1及Th17型极化免疫反应可能参与ALI病程中的免疫失衡。氯沙坦可能通过抑制肺cDC成熟和Th1及Th17型极化反应而对ALI具抗炎和免疫调节反应。

目录

声明

摘要

缩略词表(Abbreviation)

前言

综述一

综述二

主要实验材料、仪器与试剂

第一部分 脂多糖诱导急性肺损伤小鼠肺、血和脾常规树突状细胞动态变化及与肺损伤关系

参考文献

第二部分 急性肺损伤防治新途径：氯沙坦抑制肺常规树突状细胞成熟和Th1及Th17极化

参考文献

结论

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