声明
缩略词表
摘要
第一章 前言
1．1 基因治疗
1．1．1 基因治疗及基因递送的一般过程
1．1．2 基因载体的类型
1．2 非病毒基因载体的导入方法
1．2．1 物理方法
1．2．2 化学方法
1．3 阳离子聚合物合成方法
1．3．1 氮氧调控自由基聚合(NMP)
1．3．2 可逆加成-断裂链转移(RAFT)
1．3．3 原子转移自由基聚合(ATRP)
1．4 阳离子聚合物基因载体的结构修饰方法
1．4．1 引入亲水性基团
1．4．2 可降解基团的修饰
1．4．3 靶向基因修饰
1．4．4 内涵体破坏性基团或成分的引入
1．4．5 核定位信号因子(NLS)修饰
1．5 本论文研究的主要内容
参考文献
第二章 shRNA的扩增与纯化
2．1 引言
2．2 实验试剂与仪器
2．3 质粒的扩增与纯化
2．3．1 质粒扩增
2．3．2 质粒的提取
2．3．3 质粒的纯化
2．4 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验
2．5 实验结果与讨论
2．5．1 shRNA提取及纯化结果
2．5．2 质粒扩增的结果
2．6 本章小结
参考文献
第三章 N-3-胍丙基甲基丙烯酰胺-s-N-3-葡萄糖氨丙基甲基丙烯酰胺共聚物(GPMA-s-GAPMA)作为基因载体的研究
3．1 引言
3．2 实验部分
3．2．1 实验试剂与仪器
3．2．2 N-3-氨丙基甲基丙烯酰胺-s-N-3-葡萄糖氨丙基甲基丙烯酰胺(APMA-s-GAPMA，AG)共聚物的合成
3．2．3 APMA-s-GAPMA共聚物氨基含量的测定(茚三酮法)
3．2．4 N-3-胍丙基甲基丙烯酰胺-s-N-3-葡萄糖氨丙基甲基丙烯酰胺(GPMA-s-GAPMA，记为GG)无规共聚物的合成
3．2．5 GPMA-s-GAPMA共聚物的分子量测定
3．2．6 GPMA-s-GAPMA(记为GG)共聚物／shRNA复合物的电泳阻滞实验
3．2．7 GPMA-s-GAPMA(记为GG)共聚物／shRNA复合物的粒径与表面Zeta电位实验
3．2．8 细胞培养实验
3．2．9 GPMA-s-GAPMA共聚物／shRNA复合物的细胞毒性实验
3．2．10 GPMA-s-GAPMA共聚物／shRNA复合物的细胞转染实验
3．3 结果与讨论
3．3．1 N-3-胍丙基甲基丙烯酰胺-s-N-3-葡萄糖氨丙基甲基丙烯酰胺(GPMA-s-GAPMA，GG)无规共聚物的制备与表征
3．3．2 GPMA-s-GAPMA共聚物／shRNA复合物的凝胶电泳
3．3．3 GPMA-s-GAPMA共聚物／shRNA复合物粒径
3．3．4 GPMA-s-GAPMA共聚物／shRNA复合物Zeta电位
3．3．5 GPMA-s-GAPMA共聚物／shRNA复合物的细胞毒性
3．3．6 GPMA-s-GAPMA共聚物／shRNA复合物的细胞转染
3．4 本章小结
参考文献
第四章 半乳糖化N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺-b-N-3-胍丙基甲基丙烯酰胺共聚物(Galactosylated HPMA-b-GPMA)作为基因载体的研究
4．1 引言
4．2 实验部分
4．2．1 试剂与仪器
4．2．2 N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺-b-N-3-氨丙基甲基丙烯酰胺(HPMA-b-APMA，记为HA)共聚物的合成
4．2．3 N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺-b-N-3-氨丙基甲基丙烯酰胺(HPMA-b-APMA，记为HA)氨基含量的测定
4．2．4 半乳糖化N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺-b-N-3-氨丙基甲基丙烯酰胺(Galactosylated HPMA-b-APMA)共聚物的合成
4．2．5 半乳糖化N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺-b-N-3-氨丙基甲基丙烯酰胺(Galactosylated HPMA-b-APMA)共聚物中半乳糖含量的测定(苯酚硫酸法)
4．2．6 半乳糖化N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺-b-N-3-胍丙基甲基丙烯酰胺(Galactosylated HPMA-b-GPMA)共聚物的合成
4．2．7 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物分子量的测定
4．2．8 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物／shRNA复合物电泳阻滞实验
4．2．9 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物／shRNA复合物粒径和Zeta电位实验
4．2．10 细胞培养
4．2．11 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物／shRNA复合物的细胞毒性实验
4．2．12 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物／shRNA复合物的细胞转染实验
4．3 结果与讨论
4．3．1 半乳糖化N-2-羟丙基甲基丙烯酰胺-b-N-3-胍丙基甲基丙烯酰胺(Galactosylated HPMA-b-GPMA)共聚物的制备与表征
4．3．2 HPMA-b-APMA共聚物中的氨基含量
4．3．3 Galactosylated HPMA-b-APMA共聚物中的乳糖含量
4．3．4 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物／shRNA复合物的凝胶电泳
4．3．5 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物／shRNA复合物的粒径
4．3．6 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物／shRNA复合物Zeta电位值
4．3．7 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物／shRNA复合物的细胞毒性
4．3．8 Galactosylated HPMA-b-GPMA共聚物／shRNA复合物的细胞转染
4．4 本章小结
参考文献
第五章 全文总结
致谢
