应用旋转式生物反应器体外构建组织工程软骨的实验研究

摘要

目的： 探讨应用HFB-40型旋转式生物反应器对构建组织工程软骨的影响。 方法： 无菌条件下解剖分离3-5天龄胎兔四肢关节软骨，将软骨片剪碎至约1mm3大小，再用0.25％的胰蛋白酶和0.2％的Ⅱ型胶原酶依次消化后获取软骨细胞。体外扩增至第2代后，收集细胞并调整细胞浓度至4×107/ml，将所得软骨细胞接种于1mm×4mm×4mm大小长方体聚乳酸聚羟基乙酸聚合物(PLGA)支架上，培养一周后，随机分成A、B两组，每组10个支架。A组为实验组，培养于生物反应器内；B组为对照组，培养于普通培养瓶内。A组生物反应器转速维持在15-30转/分钟，保持软骨细胞广-PLGA支架复合物在震荡环境下保持悬浮状态，每2-3天换液50％-60％；B组软骨细胞-PLGA支架复合物在静止的培养瓶培养。A、B两组连续培养4周。4周后采用HE染色法观察组织工程软骨细胞增殖及分布；甲苯胺蓝染色观察软骨细胞硫酸糖氨多糖(GAG)的分泌和分布；Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察软骨细胞Ⅱ型胶原分泌和分布，并用Image-proplus图象分析系统对Ⅱ型胶原免疫组织化学染色切片行Ⅱ型胶原半定量分析；并用1，9二甲基亚甲蓝法和小牛胸腺DNA法定量检测软骨细胞-PLGA支架复合物的GAG和DNA含量。 结论： 应用HFB-40型旋转式生物反应器，能够提供更加有利于软骨细胞在PLGA中生长的外部环境，促进软骨细胞增殖，并增加Ⅱ型胶原、GAG等细胞外基质的合成，更有利于组织工程软骨的形成。

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致谢

综述与参考文献 组织工程体外构建软骨组织的研究进展