高尿酸血症通过调控肾上皮钠通道(ENaC)介导高血压发生的机制研究

摘要

目的：肾脏通过调节远曲小管以及集合管上皮细胞膜上的钠离子通道(ENaC)调节人体内的水、钠平衡，维持机体的血压稳定。肾小管上皮细胞ENaC的过度激活是多种类型高血压发病的重要因素之一。大量流行病学及临床资料证明，高尿酸血症与高血压，尤其是盐敏感性高血压的发生发展密切相关，但是二者之间内在的联系至今尚未阐明。本研究的目的是探讨高尿酸血症引起盐敏感性高血压的过程中，对肾脏上皮钠离子通道表达的影响及其相关机制。
　　方法：大鼠被随机分成4组每组（5只）:对照组(Con);氧嗪酸组(OA):2％ OA的饮食和饮水中加入6mg/dl的尿酸;苯溴马隆组(OA+Ben):OA处理联合饮水中加入10mg/kg/d的苯溴马隆;阿米洛利组(OA+Ami): OA处理联合饮水中加入1mg/kg/d的阿米洛利。第0，3，6周检测各组大鼠血尿酸(UA)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、血醛固酮(ALD)、血Na+、K+、Cl-及尿Na+、尿K+、尿Na+/K+。第0，2，4，6周检测各组大鼠血压包括收缩压(SBP)、舒张压(DBP)及脉率。第6周处死大鼠后检查肾脏形态学(HE染色和Masson染色)。免疫组化及Western blot方法检测大鼠肾脏α-、β-、γ-ENaC的表达。体外培养肾脏集合管上皮细胞(mCCD)给予尿酸(0、1、3、6mg/dl)刺激48小时，Western blot方法检测mCCD的α-、β-、γ-ENaC表达;检测ENaC调节复合物(ERC)的成分SGK1，GILZ1，P-ERK1/2，ERK1/2的表达来揭示尿酸对ENaC调控的分子机制。使用Ussing chamber电生理检测尿酸(6mg/dl)处理mCCD细胞24小时后的ENaC介导的短路电流(Isc)的影响。
　　结果：与Con组比较，第6周OA组大鼠的SBP、DBP、血UA、BUN、Cr及ALD有显著的升高，尿Na+排泄显著降低，尿Na+/K+显著降低，血Na+、K+、Cl-及尿K+无显著差异。肾脏病理提示肾小球基本正常，局灶肾小管萎缩和肾间质纤维化。与OA组比较，OA+Ben组大鼠SBP及DBP有显著的降低，血UA、ALD、BUN、血Cr有显著的降低，尿Na+、尿Na+/K+有显著的升高，肾脏病理提示肾间质病变减轻。与OA组比较，OA+Ami组大鼠SBP、DBP、 BUN及血Cr有显著的降低，尿Na+和尿Na+/K+有显著的增加，血UA及ALD无显著差异，肾脏病理提示肾间质病变减轻。免疫组化及Western blot分析提示，与Con组相比，OA组大鼠的肾集合管ENaC的表达显著增加。苯溴马隆能显著降低高尿酸诱导的肾集合管ENaC表达。阿米洛利不能显著降低高尿酸诱导的肾集合管ENaC表达。在mCCD细胞中，尿酸剂量依赖性增加α-、β-、γ-ENaC的表达。Ussing chamber电生理检测尿酸刺激mCCD细胞的Isc增加。上述结果提示高尿酸可以增加肾脏集合管上皮细胞的ENaC表达和功能。此外，Western blot分析提示，在高尿酸刺激的mCCD细胞中，ENaC调节复合物成分SGK-1、GILZ1的表达增加，P-ERK1/2表达下调。
　　结论：高尿酸血症诱导高血压的发生和肾间质的损伤。高尿酸诱导高血压的发生与肾脏ENaC表达和活性增加有关，其作用机制包括高尿酸刺激ENaC调节复合物成分GILZ1，SGK1的表达和抑制p-ERK1/2的表达。

目录

声明

摘要

第一部分：高尿酸血症诱导大鼠高血压和肾脏损伤的发生

前言

材料与方法

结果

分析与讨论

结论与展望

第二部分：高尿酸血症上调肾脏集合管上皮细胞ENaC的表达诱导大鼠高血压的发生

前言

材料与方法

结果

分析与讨论

结论与展望

第三部分：高尿酸血症上调肾脏集合管上皮细胞ENaC的机制研究

前言

材料与方法

结果

分析与讨论

参考文献

结论与展望

综述：高尿酸相关的高血压与ENaC的关系

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