Afatinib对T790M介导一代EGFR-TKI耐药非小细胞肺癌的放射增敏分子机制研究及其在肺癌脑转移中的作用

摘要

第一部分
　　Afatinib作为第二代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)，已有证据显示其对EGFR敏感型突变非小细胞肺癌患者疗效确切。然而，afatinib联合包括放疗在内其它治疗未被详细研究。本研究中，我们通过长期逐级暴露于gefitinib建立了gefitinib耐药细胞株PC-9-GR细胞，建立的PC-9-GR细胞发生获得性T790M突变。Afatinib显著增加了携带获得性T790M突变的PC-9-GR放疗反应，而对原发T790M突变的H1975和EGFR野生型的H460细胞无明显作用。在PC-9-GR细胞中，afatinib阻断了EGFR和ERK的磷酸化，并造成放疗后AKT磷酸化延迟。Afatinib也导致PC-9-GR细胞放疗后凋亡增加，抑制DNA损伤修复功能，并在移植瘤模型中增强了放疗的抑瘤效果。本研究提示afatinib可能对携带获得性T790M突变非小细胞肺癌是一种有潜力的放疗增敏剂，也为以后临床应用afatinib联合放疗提供了理论支撑。
　　第二部分
　　临床上发现afatinib能够治疗脑转移，但具体的机制尚不清楚。本研究评价afatinib治疗脑转移的疗效并评估其穿透血脑屏障的能力以及作用靶点。本研究利用建立的小鼠脑转移模型，对肿瘤负荷每周测量一次。肿瘤生长抑制率用TGI=[1-（治疗组肿瘤大小变化/对照组肿瘤大小变化）×100％]表示。我们同时测定afatinib的药动药效学参数。结果发现15 mg/kg和30 mg/kg afatinib能够显著抑制PC-9细胞增殖，第14天时TGI分别为90.2％和105％。血浆afatinib浓度在给予30mg/kg的afatinib后，0.5h浓度为91.4±31.2 nmol/L，1h后达到峰值为417.1±119.9nmol/L，然后逐渐下降。脑脊液中afatinib浓度与血浆类似。Afatinib在血浆和脑脊液的半衰期分别为5.0 h和3.7 h。血浆和脑脊液的AUC(0-24h)分别为2375.5nmol/h和29.1 nmol/h。血浆和脑脊液afatinib浓度呈正相关(r=0.844，p＜0.01)。免疫组化显示pEGFR信号在给予30 mg/kg afatinib1h后降低了90％。药效学分析显示Emax为86.5％，EC50为0.26 nmol/L。脑脊液afatinib浓度和pEGFR之间存在负相关。本研究发现afatinib能够透过血脑屏障抑制肺癌脑转移瘤。脑脊液浓度与血浆浓度相关，并进一步抑制了脑肿瘤组织EGFR磷酸化。我们的研究为临床肺癌脑转移患者应用afatinib治疗提供了证据支持。

目录

声明

摘要

序言

第一部分 Afatinib对T790M介导的一代EGFR-TKI耐药非小细胞肺癌的放射增敏分子机制研究

1．前言

2．材料

3．方法

4．结果

5．讨论

第二部分 小鼠模型研究afatinib治疗非小细胞肺癌脑转移中的疗效

2．材料

3．方法

4．结果

5．讨论

四、结论

参考文献

六、综述 肺癌放疗敏感性标志物研究进展

附录一 缩略词表

附录二 学术情况

致谢