高效液相色谱法和光谱法测定松花粉和龙葵中巯基化合物

摘要

植物体中的谷胱甘肽（GSH）等含巯基的化合物不仅在植物自身生理中扮演重要作用，而且对其他生命提供类似的生物活性，如抗氧化，抗癌、提高免疫力等。但许多植物缺少这些含巯基化合物的含量报道，这可能与植物样品的前处理过程不当有关。目前植物样品中活性成分的测定，大多经过细胞破壁、提纯、衍生化等前处理步骤。而巯基化合物的巯基具有还原性，故在细胞破壁提取过程中很容易被胞外的环境所氧化变性，导致无法得到样品中准确的巯基化合物含量的信息。本研究利用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的前处理方法，采用高效液相色谱法和光谱法测定了松花粉和龙葵中巯基化合物。
　　第一章绪论综述了生物体中巯基化合物的生物学功能与测定方法，并提出了本文的选题思想和主要研究内容。
　　第二章高效液相色谱法测定松花粉中GSH和Cys高效液相色谱法可以测定生物样品中各种巯基化合物。本文利用DTNB为衍生化试剂，采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的前处理方法，测定了松花粉中GSH和Cys的含量。松花粉中GSH和Cys的含量分别为0.5344μmol/g和0.4134μmol/g,回收率达101.14％和96.83%，其检测限分别为5.43μmol/L和4.96μmol/L。
　　第三章光谱法测定松花粉中总巯基和GSH的含量衍生化试剂DTNB对GSH、Cys以及含半胱氨酸残基的蛋白质中的巯基无选择性，可以测定样品中总巯基的含量，而衍生化试剂OPA与巯基化合物中的GSH选择性作用生成荧光衍生化产物。本文采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的前处理方法，利用DTNB衍生化UV-vis分光光度法和OPA衍生化荧光分光光度法测定了松花粉中总巯基和GSH的含量。松花粉中总巯基和GSH的含量分别为4.1500-4.4160μmol/g和0.5045-0.5181μmol/g，回收率达97.22%和96.44%，其检测限分别为2.2414μmol/L和0.1162μmol/L。
　　第四章光谱法测定龙葵叶子中总巯基和GSH的含量衍生化试剂4-DPS类似于DTNB，可以测定小分子巯基和蛋白巯基等样品中总的巯基含量。利用4-DPS和OPA为衍生化试剂,分别采用UV-vis分光光度法和荧光分光光度法测定了龙葵叶子中总巯基和GSH的含量。龙葵叶子中总巯基和GSH含量分别为0.3668-0.3878μmol/g和0.1151-0.1273μmol/g，回收率达98.36%和101.78%，其检测限分别为0.8994μmol/L和0.1547μmol/L。

目录

声明

第一章 绪论

1.1巯基化合物的结构及生物学功能

1.1.1半胱氨酸(Cys)

1.1.2谷胱甘肽(GSH)

1.1.3植物螯合素(PCs)

1.2巯基化合物的检测方法

1.3本文选题思想及主要研究内容

1.3.1选题思想

1.3.2研究内容

第二章高效液相色谱法测定松花粉中GSH和Cys

2.1引言

2.2实验部分

2.2.1仪器和试剂

2.2.2实验方法

2.3结果与讨论

2.3.1GSH与Cys标准品混合溶液与松花粉样品提取液的色谱图

2.3.2生物样品前处理对测定结果的影响

2.3.4松花粉中GSH和Cys的定量测定

2.3.5回收率和检测线

2.4结论

第三章光谱法测定松花粉中总巯基和GSH的含量

3.1引言

3.2实验部分

3.2.1仪器和试剂

3.2.2实验方法

3.3结果与讨论

3.3.1DTNB和OPA对巯基化合物衍生化反应的选择性

3.3.2生物样品前处理对测定结果的影响

3.3.3松花粉样品的光谱测定结果

3.3.4标准加入法测定松花粉中总巯基和GSH的含量

3.3.5标准曲线法测定松花粉中总巯基和GSH的含量

3.3.6回收率和检测线

3.4结论

第四章光谱法测定龙葵叶子中总巯基和GSH的含量

4.1引言

4.2实验部分

4.2.2实验方法

4.3结果与讨论

4.3.14-DPS对巯基化合物衍生化反应的选择性

4.3.2不同前处理方法对测定结果的影响

4.3.3标准加入法测定龙葵叶子中总巯基和GSH的含量

4.3.4 标准曲线法测定龙葵叶子中总巯基和GSH的含量

4.3.5 回收率和检测线

4.4结论

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文及其他成果

致谢