对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤模型机理研究

摘要

目的：急性肝损伤是肝脏疾病发生、发展以及最终走向肝功能衰竭的共同途径，建立与人类急性肝损伤的发展病变过程相类似的动物模型极其重要。急性肝损伤有很多种动物模型，本实验重点研究APAP引起的小鼠急性肝损伤的发病机制。对乙酰氨基酚（APAP）是缓解疼痛减少发热最广泛使用的药物之一。APAP一般在治疗剂量下是安全的，然而APAP的过量可能会导致严重的肝脏损害。
　　方法：急性肝损伤模型组腹腔注射300mg.kg-1的APAP，正常组给予等效体积的生理盐水。APAP给药后在不同时间评估天冬氨酸氨基转移酶（AST），丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平，同时观察肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的水平，并通过苏木精和伊红（H＆E）染色观察病理变化。从肝组织中提取的蛋白进行蛋白印迹分析法分析。
　　结果：根据正常组的光学显微镜评估，肝实质的形态规则是显而易见的。模型组可见肝小叶内细胞明显被浸润且呈空泡状，小叶内也有严重的炎性细胞，且细胞浑浊明显出现核固缩，特别是在APAP处理4小时的小鼠显示出最严重坏死。在APAP给予后4h时，血清ALT和AST的水平与正常组比较明显增加（P<0.001），肝组织中GSH、GSH-PX含量与正常组比较明显降低（P<0.001）。Western印迹分析表明，在 APAP给予后4h时，APAP活化了 JNK和 STAT3，而且pro-caspase-3和Bcl-2的蛋白表达也明显降低，在APAP给药后12小时JNK的表达恢复到接近正常对照组。
　　结论：本实验通过腹腔注射途径给予小鼠300mg.kg-1的APAP，可以成功诱导小鼠急性肝损伤，为继续探索保肝药物打下了坚实的基础，并提供理论依据。

目录

声明

第一章 前 言

第二章 实验材料与仪器

2.1实验药品及试剂

2.2 主要仪器

第三章 实验方法

3.1 实验方法

3.2 生化指标测定

3.3 动物组织蛋白提取：

3.4 western blotting实验步骤:

3.5 苏 木 素 - 伊 红 HE （ Hematoxylin Eosin ） 染 色

3.6 统计学处理

第四章 实验结果

4.1 判断给予APAP后不同时间对ALT、AST水平的影响

4.2 判断给予APAP后不同时间对GSH、GSH-PX水平的影响

4.3 组织病理学特征

4.4 APAP诱导小鼠肝损伤中对JNK和P-JNK、STAT3、P-STAT3、表达的影响

4.5 APAP诱导小鼠肝损伤中对pro-cas-3、pro-cas-8、pro-cas-9、Bax和Bcl-2表达的影响

第五章 实验讨论

第六章 结 论

参考文献

致谢

综述