卡托普利间接测定方法的建立及黄秋葵中GSH和总巯基(-SH)的检测

摘要

巯基化合物在生物体内发挥着重要的生理作用，同时许多含巯基化合物作为药物广泛应用在临床治疗上，因此对于巯基化合物在不同样品中的准确检测在生命科学、药理、临床医学等领域具有实际意义。本研究用巯基衍生化试剂5，5'-二硫双-硝基苯甲酸（DTNB），利用测定衍生化试剂与巯基定量释放出的衍生化产物2-硝基4巯基-苯甲酸(NTB)，建立了含巯基药物卡托普利(CTP)片剂中有效成分卡托普利含量的间接测定方法，同时利用同样的原理对黄秋葵种子的谷胱甘肽(GSH)及总巯基含量进行了测定。
　　含巯基的药物含量检测方法文献报道的较多，然而不论是哪种检测方法均需要标准品且标准品不易得。从简化实验操作与经济的角度出发，本实验利用巯基衍生化试剂DTNB，以GSH为标准品，通过测定CTP和替代标准品GSH与DTNB的衍生化反应均定量释放出可被检测的衍生化产物NTB，借此利用HPLC法对含巯基药物CTP片剂中卡托普利的含量进行了检测，从而规避了含巯基药物测定中关于标准品的问题。本测定方法的回收率为100.4％，检测限为6.18μmol/L，同时用紫外光谱法进行了比对，两者测定结果基本吻合，初步确定方法可行性。
　　生物样品中细胞内巯基化合物检测所面临的最大的问题是样品前处理过程中巯基的氧化变性导致的灵敏度的降低所引起的漏检，使得许多植物样品缺少具有重要生物活性功能的巯基化合物的含量信息。本研究采用巯基衍生化试剂DTNB，采用细胞破壁与衍生化反应同步的提取方法，使得植物细胞内的巯基与DTNB生成稳定的衍生化产物，规避了巯基在前处理过程中的氧化变性。再利用HPLC法通过测定衍生化反应定量生成的衍生化产物的方法，测定了黄秋葵种子内的GSH和总巯基含量，结果显示秋葵种子中谷胱甘肽含有量为1.47μmol/g，RSD为1.18％;总巯基(-SH)的含有量为4.85μmol/g，RSD为0.74％。检测限分别为0.1584μmol/g和0.1837μmol/g，回收率分别为100.38％和100.7％。
　　本实验不仅为巯基类药物的分析研究及质量检测提供了简便、经济快捷的分析方法，也为筛选富含巯基的生物样品及生物样品中巯基化合物的检测解决了疑难问题。为含巯基化合物的样品的定性与定量分析提供了方法学依据。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 含巯基药物

1．2 本文选题思想及主要研究内容

第二章 HPLC法测定卡托普利片中卡托普利含量

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果与分析

2．4 回收率和检测限

2．5 结论

第三章 紫外光谱法测定卡托普利片中有效成分的含量

3．1 引言

3．2 实验部分

3．3 结果与讨论

3．4 结论

第四章 黄秋葵种子中巯基化合物的检测

4．1 引言

4．2 实验部分

4．3 结果与讨论

4．4 结论

结论

参考文献

致谢