果蝇Hsp22多克隆抗体的制备及其在hsp22基因转录调控研究中的应用

摘要

基因的正常表达与调控是机体正常生长、发育所必需的。组蛋白乙酰转移酶(histoneacetyltransferases，HAT)和组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase，HDAC)可以通过调节组蛋白或转录因子的乙酰化状态来调节基因的活化或沉默。HAT引发染色质结构的松散，激活转录；而HDAC则可导致染色质集缩，并抑制特定靶基因的转录。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histonedeacetylaseinhibitors，HDAI)能抑制HDAC的活性，并通过改变组蛋白或转录因子的乙酰化状态诱导相关基因的表达。 热休克蛋白(HSP)作为高度保守的“分子伴侣”，在维持细胞必需的蛋白质空间构象、蛋白质聚集折叠、跨膜运输和转位、细胞骨架及核骨架稳定等基本功能方面发挥着重要调节作用。它们参与细胞凋亡、热耐受、免疫调控、抗肿瘤及病毒感染等病理生理过程，进而从多个方面影响着生物体寿命。果蝇在热胁迫和正常衰老过程中，体内会产生热休克蛋白，其中包括Hsp22蛋白，它可以保护机体免受胁迫危害，并与延长果蝇寿命相关。本论文旨在利用自制的Hsp22抗体，通过Westernblot实验，探讨乙酰化与hsp22基因表达的关系。 我们用PCR方法以果蝇的cDNA为模板扩增出热休克蛋白22基因(hsp22)，将其插入原核表达载体pET(28a)中并转化至大肠杆菌中，重组大肠杆菌经IPTG诱导，Hsp22蛋白得到了表达，经Ni2+-NTA亲合层析纯化，得到纯度和含量都符合用于免疫需要的Hsp22蛋白抗原。用获得的抗原免疫家兔，得到的家兔抗血清经纯化后得到抗Hsp22抗体。通过Westernblot实验证实，组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA可显著提高果蝇Hsp22蛋白的表达水平，暗示组蛋白乙酰化与hsp22基因的表达相关。

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第一章引言

第二章材料与方法

第三章结果与分析

第四章讨论

第五章结论

参考文献

致 谢

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