锦灯笼宿萼皂苷免疫增强作用及降血糖活性研究

摘要

锦灯笼为茄科植物酸浆（PhysalisalkekengiL．Var．franchetii）的干燥宿萼或带果实的宿萼。宿萼红色或橙红色，微苦。又名挂金灯、红姑娘。文献对锦灯笼果实的报道较多，但对其宿萼的报道较少。本文以成熟的锦灯笼果实宿萼为实验材料，分离纯化锦灯笼皂苷并对该皂苷的免疫活性和降血糖活性进行初步研究，为将锦灯笼宿萼皂苷开发为新型疫苗佐剂及降血糖药物奠定了理论基础。 锦灯笼宿萼皂苷的分离纯化：成熟的锦灯笼果实宿萼，先将其粉碎，经乙醇回流提取、减压浓缩、水饱和正丁醇萃取、将正丁醇层减压浓缩、少量甲醇溶解、乙醚沉淀干燥得到粗皂苷，再经D101大孔树脂进一步分离纯化锦灯笼宿萼皂苷（TSP），经三氯醋酸、氯仿．浓硫酸、醋酐－浓硫酸等方法显色鉴定TSP为甾体皂苷。本文以TSP为实验材料，进一步对其进行生物学活性研究。 本文选用0．5％的兔红细胞来检测TSP及QuilA的溶血活性。溶血性实验结果显示，TSP在浓度为500μg/ml时溶血率为3．5％，有轻微的溶血性，远远小于QuilA（HD50约为16．6μg/ml）的溶血性。 以OVA作为抗原与Alum（铝佐剂）（200μg）、QuilA（10，20μg）、TSP（12．5，25，50μg）共同对ICR小鼠进行皮下免疫，以OVA作为阴性对照，Alum、QuilA作为阳性对照组来检测TSP对OVA免疫小鼠细胞免疫和体液免疫应答的影响。（1）TSP对免疫小鼠细胞免疫应答的影响：通过对免疫小鼠脾淋巴细胞转化实验、CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的含量变化以及对迟发型超敏反应（DTH）的实验结果分析表明，TSP与QuilA一样显著增强了细胞免疫应答，其作用效果优于铝佐剂；（2）TSP对免疫小鼠体液免疫应答的影响：ELISA方法检测小鼠抗血清中抗OVA特异性抗体的实验结果表明，TSP与QuilA一样显著提高了IgG、IgG1及IgG2b的抗体滴度；铝佐剂只对IgG、IgG1有明显的增强作用，对IgG2b的抗体滴度没有影响，证明TSP与QuilA一样显著增强了体液免疫应答，其作用效果优于铝佐剂。因此TSP是较好的免疫佐剂。 此外，药理学实验表明，TSP能降低四氧嘧啶诱发的糖尿病小鼠的血糖浓度（P<0．01），效果与阳性对照消渴丸相当，TSP还能缓解糖尿病小鼠的一些症状，如恢复小鼠体重，减少饮水量等。

目录

文摘

英文文摘

声明

引 言

第一章实验材料

1实验器材

2主要试剂

3实验材料

4实验动物

第二章实验方法

1锦灯笼宿萼皂苷(TSP)的提取

2TSP的分离纯化及含量测定

3TSP的生物活性研究

第三章实验结果与分析

1TSP的提取纯化及含量测定

2TSP的生物活性研究

第四章讨论

第五章结论

参考文献

致 谢