米糟蛋白的提取及制备高F值寡肽的研究

摘要

米糟是大米发酵生产味精，酒精，乳酸，淀粉糖等后剩下的副产物，其中蛋白质含量高达50%～60%，可用作制备蛋白粉，各种食品添加剂，或者制备各种具有生理活性的多肽。但目前，我国的企业一般将米糟作为动物饲料出售，造成优质蛋白资源多的极大浪费，因此如何利用米糟蛋白，提高其经济效益，就显得非常重要。高F值寡肽即指F值高于20的寡肽。医学实验证明，高值寡肽有很好的生理功能，如消除或减轻肝性脑症状，抗疲劳，改善蛋白营养，缓解酒精中毒，抑制癌细胞增殖，降低血清胆固醇浓度等等，有很强的应用价值。本文主要研究了米糟经过前处理后得到浓缩蛋白，然后以此为原料，经过两步酶解，得到含高F值寡肽和氨基酸的混合液，并用活性炭吸附，除去其中的游离氨基酸，从而得到纯度较高的高F值寡肽。具体研究内容如下：
　　 ⑴将米糟粉碎，过100目筛后，用索氏抽提法去掉其中的脂肪，然后经过水洗，除去其中的可溶性物质，在此过程中，研究了水洗的温度，时间，料液比这三个因素，在单因素实验的基础上进行正交实验，利用SPSS统计软件分析实验数据，得到最优因素水平为：温度70℃，时间0.5h，料液比为1﹕10，在此条件下，得到的浓缩物中蛋白质含量为78.4％，第二次水洗后蛋白质含量达到了82.5％。
　　 ⑵采用响应面法来优化高F值寡肽的提取工艺。考虑到双酶水解中各酶都有很多因素，并且这些因素间可能会有交互影响，因此本文综合统筹考虑这些因素。在单因素实验的基础上，找出六个影响因素，然后通过Plackett-Burman实验设计来筛选出三个显著影响因素，分别是胰蛋白酶时间，风味蛋白酶时间，风味蛋白酶pH，然后用响应面的Box-Benhnken实验设计来分析这三个因素，得到合适的模拟回归方程。结果表明，回归方程确定系数为R2=0.9865。然后通过方程计算得到这三个因素的条件为：X1=-0.25，X2=0.44， X3=-0.15，即即胰蛋白酶水解时间为1.75 h，风味蛋白酶水解时间为2.44 h，风味蛋白酶pH为5.85，代入方程得此时水解度为33.36%。
　　 ⑶以双酶水解得到的多肽和氨基酸混合液为原料，选取活性炭作为吸附剂，除去其中的游离芳香族氨基酸，同时起到脱色效果。采用响应面的Box-Benhnken实验设计，以OD220∕OD280为响应值，OD220越大表明水解液中支链氨基酸越多，OD280越小表明水解液中芳香族氨基酸越少，因此OD220∕OD280越大表明水解液中支链氨基酸相对于芳香族氨基酸越多。得到活性炭吸附的最佳工艺条件为：温度，时间，液固比，在此条件下，OD220∕OD280达到了50.40。
　　 ⑷氨基酸分析仪测定双酶水解液中的氨基酸成分，从而计算得到其F值为37.62；然后通过蛋白纯化系统测得其多肽分子量组分集中在两个分子量段，分别是：300-500的组分，700-1020的组分。这完全符合高F值寡肽的要求。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 前言

第二章 除杂法提高米糟蛋白质含量的研究

第三章 米糟蛋白质双酶水解制备多肽液的研究

第四章 多肽液纯化的研究

主 要 结 论

展 望

论文创新点

参考文献

攻读硕士学位期间研究成果

致 谢