鼻咽癌患者鼻咽分泌物中PLUNC基因家族差异蛋白组分析

摘要

鼻咽癌(Nasopharyngealcarcinoma，NPC)是东南亚地区及我国南方各省常见的一种恶性肿瘤，其发生不仅有明显的地域性和家族聚集现象，而且存在基因组不稳定的特性。鼻咽癌是一种多基因多阶段侵袭性疾病，与多种癌基因、抑癌基因的改变相关，但目前其确切的分子机制仍未清晰阐明。 目前发现人类PLUNC家族蛋白至少有8个以上成员，它们是位于呼吸道上皮与消化道上皮表面的分泌蛋白。我室张必成博士分离鉴定的NASG(SPLUNC1)和MGC14597(LPLUNC1)，即属于PLUNC家族中全新转录本，它们在鼻咽、气管相对特异性表达，而在鼻咽癌中表达下调。蛋白质组学(Proteomics)技术是一种高通量的后基因组研究方法，近年来广泛地应用于人类疾病，尤其是肿瘤发病机制的研究。运用蛋白质组学技术研究鼻咽癌分泌蛋白组，不仅能全面直观的了解PLUNC家族蛋白在NPC中的差异表达，而且能快捷有效的找出和鉴定其它未知分泌蛋白的改变。 收集正常人和NPC患者鼻咽分泌物，混合同类样品，经脱盐柱脱盐后采用双向凝胶电泳分离蛋白质，凝胶银染显色，图象扫描后根据PLUNC蛋白分子生物学特性并参考国外学者研究结果，确定PLUNC蛋白大概位置。用PDQuest软件分析，可知所推测为PLUNC蛋白的11个蛋白点在NPC中表达下调。应用MALDI-TOF-MS对11个下调蛋白点进行分析鉴定，有10个获得了肽质指纹图，蛋白质数据库搜索结果皆为PLUNC蛋白。此结果说明PLUNC蛋白在鼻咽癌中表达下调，具有极高的临床价值，可作为NPC的分子标记物，为NPC提供早期诊断和治疗的依据。 同样方法处理混合样品，得到正常人鼻咽分泌物2DE凝胶图和NPC患者鼻咽分泌物2DE凝胶图，通过PDQuest软件分析确立了10个明显表达差异的蛋白点，其中6个蛋白点在正常人鼻咽分泌物中高表达，4个蛋白点在NPC患者鼻咽分泌物高表达。应用MALDI-TOF-MS对10个蛋白点进行分析，有5个获得了肽质指纹图，通过蛋白质数据库搜索鉴定出5种蛋白质：免疫球蛋白alpha-1重链恒定区、免疫球蛋白重链恒定区1、MGC编号为39273的未命名蛋白、PRO2675、A链(联合人类血清白蛋白形成Ga模块晶状体结构)。此结果为确定鼻咽癌新的差异表达提供了重要依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：资助、缩写词简表

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第一章前言

第二章材料与方法

2.1材料与液体配制

2.1.1鼻咽分泌物

2.1.2试剂

2.1.3仪器

2.1.4液体配制

2.2方法

2.2.1样品准备

2.2.2二维PAGE电泳

2.2.3硝酸银染色

2.2.4图象扫描及分析

2.2.5胶内原位酶解蛋白质点

2.2.6蛋白质酶解后样品的提取

2.2.7 MALDI-TOF-MS肽质指纹图分析

2.2.8质谱数据的数据库搜索

第三章结果

3.1蛋白质组学技术研究PLUNC蛋白在NPC中的表达

3.1.1鼻咽分泌物脱盐后蛋白浓度测定

3.1.2二维PAGE电泳及染色

3.1.3 PDQuest软件分析二维凝胶图谱

3.1.4 MALDI-TOF-MS肽质指纹图分析

3.1.5质谱数据的数据库搜索和蛋白质鉴定

3.2从NPC分泌蛋白组寻找新的差异表达

3.2.1鼻咽分泌物脱盐后蛋白浓度测定

3.2.2二维PAGE电泳及染色

3.2.3 PDQuest软件分析二维凝胶图谱

3.2.4 MALDI-TOF-MS肽质指纹图分析

3.2.5质谱数据的数据库搜索和蛋白质鉴定

第四章讨论

4.1 PLUNC蛋白可能存在多种异构体

4.2 PLUNC蛋白的临床价值

4.3 NPC患者的鼻咽分泌物中存在其它分泌蛋白的改变

4.4肿瘤标志物的蛋白质组学研究

结论

参考文献

综述 肿瘤标志物的研究进展及应用前景

致谢