氟伐他汀对溶血磷脂酰胆碱诱导动脉平滑肌细胞增殖与凋亡相关基因表达的影响

摘要

目的：观察氟伐他汀对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐动脉血管平滑肌细胞(HUASMC)增殖及凋亡相关基因的影响并探讨其机制，为他汀类药物的临床应用提供实验依据。 方法：原代培养人脐动脉平滑肌细胞待细胞生长融合后，用无血清DMEM培养液培养24h，使细胞同步化后分组进行实验。随机分成正常对照组、LPC组、氟伐他汀预孵育组，氟伐他汀预孵育组按浓度不同又分为10-5mol·L-1、10-6mol·L-1、10-7mol·L-1，相同浓度(10-6mol·L-1)氟伐他汀按时间不同又分为6h、12h、24h、48h、72h。用细胞计数和MTT比色法检测细胞增殖及细胞活力；比色法检测细胞和细胞培养液中NO的含量；Hoechst-33258染色法观察细胞凋亡情况；流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期分布；免疫组织化学染色方法和RT-PCR测定血管平滑肌凋亡相关因子Survivin、Fas的表达。 结果： (1)溶血磷脂酰胆碱促进细胞增殖，使细胞数量和增殖指数增大，氟伐他汀能抑制5mg·L-1，溶血磷脂酰胆碱(LPC)对血管平滑肌细胞的增殖作用，使细胞NO释放量增加，细胞数量和增殖指数减少； (2)流式细胞仪观察LPC组血管平滑肌细胞处于DNA合成期和分裂期，S期的百分数高于对照组，氟伐他汀预孵育后使血管平滑肌细胞周期中的G0/G1期细胞比例增多，S期细胞比例减少，细胞凋亡率较对照组升高。 (3)Hoechst-33258染色法发现：氟伐他汀诱导血管平滑肌细胞产生凋亡，随着作用时间延长和浓度增大细胞凋亡发生率增加，可见大量血管平滑肌细胞发生核碎裂和核边聚现象。 (4)LPC增加Survivin的表达，细胞内可见大量棕黄色颗粒，氟伐他汀预孵育组6h时Survivin.表达开始下降，24h下降最明显；Fas基因早期表达不明显，到48h、72h后明显表达。 结论：氟伐他汀抑制LPC促HUASMC增殖作用，促进细胞发生凋亡，血管平滑肌细胞凋亡率升高，其促凋亡作用主要与上调FasmRNA表达，下调Survivin mRNA的表达有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号说明

声明

第一章前言

第二章材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验细胞

2.1.2实验药品与试剂

2.1.3主要仪器与设备

2.2实验方法

2.2.1实验设计

2.2.2人脐动脉平滑肌细胞体外原代培养

2.2.3血管平滑肌细胞的鉴定

2.2.4细胞计数和生长曲线的测定

2.2.5细胞毒性试验

2.2.6 MTT比色法检测细胞增殖活力

2.2.7一氧化氮释放量的测定

2.2.8流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率

2.2.9 Hoechst-33258染色

2.2.10免疫细胞化学法检测血管平滑肌细胞Survivin、Fas因子

2.2.11RT-PCR检测人脐动脉平滑肌细胞Survivin mRNA、Fas mRNA的表达

2.3统计学处理

第三章结果

3.1血管平滑肌细胞光镜及α-actin蛋白染色

3.2细胞生长曲线和细胞毒性实验测定

3.3氟伐他汀对LPC诱导血管平滑肌细胞增殖作用的影响

3.4氟伐他汀对LPC作用人脐动脉平滑肌细胞NO释放量的影响

3.5氟伐他汀对LPC诱导人脐动脉平滑肌细胞增殖周期的影响

3.6氟伐他汀对LPC作用血管平滑肌细胞凋亡率的影响

3.7氟伐他汀对LPC诱导平滑肌细胞Survivin、Fas因子表达的影响

3.8氟伐他汀对LPC诱导血管平滑肌细胞Survivin mRNA、Fas mRNA表达的影响

第四章讨论

第五章结论

参考文献

综述 血管平滑肌细胞与动脉粥样硬化

致谢

攻读硕士学位期间主要研究成果目录