血脑屏障上的P-糖蛋白，多药耐药蛋白2和乳腺癌耐药相关蛋白对奎硫平的作用

摘要

一、目的： 建立同时测定大鼠脑脊液、脑组织及血浆中奎硫平及其活性代谢物7-羟基奎硫平，7-羟基N-烷基奎硫平的方法；在体内研究奎硫平及其活性代谢物是否是血脑屏障上的转运蛋白P-糖蛋白(P-gp)，多药耐药蛋白2(MRP2)、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)的底物；并初步探讨血管-脑脊液屏障上转运蛋白P-gp的编码基因mdrla表达水平的个体差异对奎硫平进入中枢的影响。 二、方法： 1.给药及采样1.1选用清洁级健康成年雄性SD大鼠160只按体重进行随机区组设计，分为四组。分别腹腔注射生理盐水、维拉帕米(1 mg·kg-1)、丙磺舒(100 mg·kg-1)和泮托拉唑(18.8 mg·kg-1)，15分钟后灌服奎硫平(3.6 mg·kg-1)，于0，0.5，1，1.5，2，4，6和8 h各处死5只断头取血，同时在冰台上快速取脑组织。 1.2选用清洁级健康成年雄性SD大鼠40只按体重进行完全随机设计，分为两组。分别腹腔注射生理盐水和维拉帕米(1 mg·kg-1)，15分钟后灌服奎硫平(3.6 mg·kg-1)，于0，0.5，1，1.5，2，3，4，6和8 h尾静脉取血，同时经枕骨大孔采集脑脊液。采集完成后，快速在冰台上取出脑组织，置于液氮中保存。 2.生物样品测定方法2.1采用UPLC-MS/MS测定全血、脑脊液及1.1中取出的脑组织中奎硫平及其两种活性代谢物的浓度。 2.2采用RT-PCR测1.2脑组织中mdrla表达水平。 三、结果： 1.生物样本中药物浓度的测定结果用UPLC-MS/MS法测定奎硫平及其两种活性代谢物的浓度。在血浆中，QP,QP-OH，QP-ND分别在0.08～155 ng·mL-1、0.05～98 ng·mL-1和0.07～670 ng·mL-1浓度范围内线性良好。在脑脊液中QP,QP-ORQP-ND分别在0.02～38.8ng·mL-1、0.01～29.5 ng·mL-1和0.01～134ng·mL-1浓度范围内线性良好。在脑组织匀浆液中QP,QP-OH,QP-ND分别在0.02～38.8 ng·mL-1、0.01～29.5 ng·mL-1和0.01～134 ng-mL-1浓度范围内线性良好。方法回收率均在87％～105％范围内，日间和日内精密度均<16％。 2.大鼠灌服奎硫平脑/血浆药物浓度比的AUC0-8hQP,第I组为22.14±4.18 ng·h·mL-1；第II组为28.49±3.7 ng·h·mL-1；第III组为24.95±3.5 ng·h·mL-1；第IV组为48.76±5.8 ng·h·mL-1，仅有第II、IV组与第I组相比，其差异具有统计学意义(P<0.05)。 QP-OH:第I组为4.62±1.46 ng·h·mL-1；第II组为5.84±2.48 ng·h·mL-1；第III组为8.04±1.83 ng·h·mL-1；第IV组为15.49±2.84 ng·h·mL-1。仅有第IV组与第I组相比，其差异具有统计学意义(P<0.05)。 QP-ND:第I组为3.26±1.90 ng·h·mL-1；第II组为1.69±81 ng·h·mL-1；第III组为8.92±1.54 ng·h·mL-1；第IV组为4.04±1.35 ng·h·mL-1。第III组与第1组相比，其差异具有统计学意义(P<0.01)。 3.脑脊液/血浆药物浓度-mdrla表达水平的关系3.1脑脊液/血浆QP药物浓度比的AUC0-8h： 第I组为22.23±1.74 ng·h·mL-1；第II组为25.95±1.40 ng-h·mL-1。两者差异有统计学意义(P<0.05)。 3.2脑脊液/血浆QP药物浓度比值随着mdrla表达水平的增加而降低，两者的拟合回归曲线为Y=161.26e-1.65X，相关系数r=-0.940。 四、结论： 1.在体内，QP通过P-gp，BCRP转运，QP-OH可通过BCRP转运，QP-ND能通过MRP2转运。 2.随着血管.脑脊液屏障上mdrla的表达水平的增加，奎硫平进入中枢的程度呈指数降低，mdrla表达水平的个体差异影响奎硫平进入中枢。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：本文所用英文缩写词表

声明

前言

第一部分 UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆、脑及脑脊液中奎硫平，7-羟基奎硫平和7-羟基N-去烷奎硫平的浓度

1仪器与材料

1.1仪器

1.2试剂与药品

1.3溶液的配制

2方法

2.1色谱条件

2.2质谱条件

2.3样本处理

3结果

3.1色谱-质谱行为

3.2方法学考察

4讨论与结论

第二部分 P-gp，MRP2和BCRP的抑制剂对奎硫平进入血脑屏障的作用

1材料与方法

1.1实验动物和饲养环境

1.2实验动物分组

1.3仪器及试剂

2试验设计

2.1动物实验

2.2大鼠血浆、脑组织匀浆液中药物浓度的测定

2.3统计学处理

3结果与讨论

3.1血药浓度-时间曲线及药动学参数

3.2脑/血中药物浓度-时间曲线

4讨论与结论

第三部分 Mdr1a的表达水平的个体差异与奎硫平进入血管-脑脊液屏障的相互关系

1仪器与材料

1.1实验动物和饲养环境

1.2试验动物分组

1.3仪器及试剂

2试验设计

2.1动物试验

2.2大鼠血浆、脑脊液中QP浓度的测定

2.3脑组织中RNA的提取

2.4半定量RT-PCR

2.5统计学处理

3结果

3.1脑脊液中药物浓度-时间曲线及药动学参数

3.2血浆中药物浓度-时间曲线及药动学参数

3.3 QP脑脊液/血浆中药物浓度比值-时间曲线

3.4 mdr1a表达水平与脑脊液/血浆中药物浓度比值的相关分析

4讨论与结论

全文小结

参考文献

综述：血脑屏障上的P-糖蛋白与精神药物

致谢

攻读学位期间的研究成果