高效液相色谱法测定人血浆中茴拉西坦活性代谢产物ABA及其在生物等效性研究中的应用

摘要

目的：建立检测人血浆中茴拉西坦代谢产物对甲氧基苯甲酰胺基丁酸(ABA)的高效液相色谱方法。用此方法考察试验制剂和参比制剂的相对生物利用度，并评价二者是否具有生物等效性。
　　 方法：第一部分主要为ABA的血药浓度检测方法的建立及验证。以氢氯噻嗪为内标，血浆样品经液液-萃取处理。分析柱为SymmetryShield TM RP18 C18(3.9mm×150 mm，5μm)，柱温：30℃。流动相：20 mM甲酸胺：甲醇(83:17，V/V)，流速：1.0 mL·min-1，进样量：20μL。紫外检测波长250 nm。
　　 第二部分为茴拉西坦胶囊人体生物等效性研究。本研究为开放、口服给药、随机交叉、双周期的单中心试验。20名受试者被随机分为两组，分别口服试验制剂或参比制剂。采用第一部分所建立的方法测定给药后不同时间ABA的血药浓度。利用DAS计算药动学参数并进行统计分析。主要药代参数经对数转换后以多因素方差分析(ANOVA)进行显著性检验，然后用双向单侧t检验和计算90％可信区间的统计分析方法来评价和判断药物间的生物等效性。
　　 结果：茴拉西坦活性代谢产物ABA的线性范围为53.3～13640μg·L-1，最低定量下限为53.3μg·L-1；日内、日间RSD不超过10.8％：平均回收率为96.9％～103.3％。
　　 参比制剂和试验制剂中ABA的主要药代动力学参数Cmax、Tmax、AUC0→4和AUC0→∞(均数±标准差)分别为：6948.8±3016.8和7049.3±2586.3 ng·mL-1；0.57±0.34和0.48±0.19 h；5835.9±1496.9和5770.9±1105.3 ng·h·mL-1；6008.9±1504.7和5770.9±1114.4ng·h·mL-1。受试制剂对参比制剂的相对生物利用度F(以AUC0→4作为评价依据)为：102.8％±24.9％。
　　 Tmax经非参数检验，不同制剂间无显著性差异(U=0.000，p=1.000)。AUC0→4、AUC0→∞和Cmax经对数转换后，进行方差分析，结果表明：两者在不同制剂间和不同周期间差异无显著性意义(p>0.05)。Cmax、AUC0→4和AUC0→∞双向单侧t-检验结果表明thigh和tlow均大于单侧t0.05。受试制剂AUC0→4和AUC0→∞的90％可信区间均未超出参比制剂相应AUC0→4和AUC0→∞的80％～125％的范围；受试制剂的Cmax的90％可信区间，也未超出参比制剂Cmax的70％～143％的范围。
　　 结论：该方法专属性强、快速、灵敏，适合血样中茴拉西坦代谢产物ABA的浓度检测。茴拉西坦受试制剂与参比制剂具有生物等效性。