野马追药材的质量标准研究和野马追内酯的分离纯化工艺研究

摘要

野马追是一种止咳平喘效果显著的天然药物，从中分离纯化得到的野马追内酯具有抗人体鼻咽癌细胞的功效。目前对野马追的药理研究，开发利用还不成熟。本文通过对野马追药材的质量标准进行研究考察，并在此基础上，确定了野马追内酯的分离纯化工艺。
　　 整个实验共分为三部分:
　　 1.通过研究药典中野马追药材质量标准评价指标成分金丝桃苷和野马追内酯A的薄层色谱行为和反相高效液相色谱行为，同时对野马追内酯A的顺反异构体野马追内酯B也进行了研究分析，建立一套完整准确，简便易行的质量控制方法。在此基础上，对来自不同产地的六批野马追药材进行评价研究，为野马追药材的质量标准评价提供了理论依据，并为下文野马追内酯的分离纯化提供药材选择依据和检测方法。
　　 2.以野马追全草为原料，通过对回流提取和超声提取工艺的比较研究，探索出野马追内酯提取率高且成本较低的提取方法。采用有机溶剂回流法提取野马追内酯，考察影响野马追内酯得率的五个影响因子，提取时间、提取溶剂、料液比、提取次数和提取温度，分别进行单因素实验。在单因素实验的基础上，建立正交实验，得到最佳提取条件:90％甲醇，以料液比1∶20的比例在70℃下回流提取2.5 h。野马追内酯A的提取率为0.0168％，内酯B的提取率为0.0394％。分别考察提取溶剂，料液比，提取次数，提取时间这四个因素对野马追内酯超声提取的影响，并且建立正交表，确定超声提取的最佳条件:90％甲醇，以料液比1∶20的比例在超声提取2次，每次30 min。野马追内酯A的提取率为0.0182％，野马追内酯B的提取率为0.0421％。通过这两种提取工艺的比较，超声提取不仅提取率高而且性质稳定，提取时间短，耗能低。
　　 3.通过对野马追内酯A和野马追内酯B纯化工艺的研究，确定了最佳纯化工艺。首先用石油醚、氯仿、水萃取野马追提取液，经HPLC分析，野马追内酯主要集中在氯仿层。回收氯仿层溶剂，得浸膏。研究各种柱色谱对野马追内酯纯化的影响，从操作易行度，生产成本等方面考虑，确定了最佳纯化工艺:首先用干柱色谱法，以氯仿甲醇溶液为洗脱剂，通过TLC法和HPLC法结合共同监测，回收浓缩含有野马追内酯的色谱段，将其拌样，以石油醚丙酮混合溶剂洗脱得含有目标物质段的粗样。将初步提纯得到的粗样上样于中压RP-C18柱，以甲醇-水1∶1混合溶剂为洗脱剂，按信号接收器的信号接收，得到纯度达到85％以上的标准品。再通过正相色谱技术纯化产物，得到纯度90％左右的野马追内酯。95％纯度以上的野马追内酯根据所需产品量的多少，选择用液相制备色谱或液相半制备色谱得到。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1．1 野马追的生物学特性及其利用价值

1．1．1 野马追的生物学特性

1．1．2 野马追的利用价值

1．1．3 野马追的利用现状

1．2 野马追的化学成分研究

1．2．1 黄酮类

1．2．2 挥发油

1．2．3 倍半萜内酯类

1．2．4 氨基酸

1．2．5 微量元素

1．2．6 野马追药材的化学鉴别

1．3 野马追的药理学功能研究概况

1．3．1 野马追及其提取物对呼吸系统的作用

1．3．2 野马追及其提取物的降压作用

1．3．3 野马追及其提取物的降脂降胆固醇作用

1．4 菊科植物中倍半萜内酯的研究

1．5 本文研究背景与意义

第二章 野马追药材质量标准研究

2．1 实验试剂及设备

2．1．1 药材样品

2．1．2 试剂来源及规格

2．1．3 实验仪器设备

2．2 野马追内酯A和野马追内酯B的定性定量研究

2．2．1 标准品溶液的制备

2．2．2 野马追内酯A，B的TLC鉴定

2．2．3 野马追内酯A，B的RP-HPLC鉴定

2．3 金丝桃苷的定性定量研究

2．3．1 标准品溶液的配制

2．3．2 金丝桃苷的TLC鉴定

2．3．3 金丝桃苷的RP-HPLC鉴定

2．4 实验小结

第三章 野马追内酯A，B的提取工艺研究

3．1 实验材料

3．1．1 原料与试剂

3．1．2 仪器设备

3．2 实验方法

3．2．1 野马追内酯提取工艺的研究

3．3 实验结果与讨论

3．3．1 回流提取法

3．3．2 超声提取

3．3．3 超声提取和回流提取对野马追内酯提取率的影响

3．4 本章小结

第四章 野马追内酯A和野马追内酯B的纯化工艺研究

4．1 实验材料

4．1．1 实验原料及处理方式

4．1．2 试剂及仪器

4．2 检测方法

4．3 实验方案的确定

4．4 野马追内酯的初步分离纯化

4．4．1 聚酰胺吸附色谱法

4．4．2 干柱色谱法

4．4．3 大孔吸附树脂色谱

4．5 野马追内酯的中等分离纯化

4．5．1 中压RP-C18

4．5．2 正相色谱法

4．6 高纯度野马追内酯标准品的制备

4．6．1 液相半制备色谱制备野马追内酯

4．6．2 液相制备色谱制备野马追内酯

4．7 实验小结

参考文献

致谢

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