心脏肥大细胞及TLR4在小鼠病毒性心肌炎发病机制中的作用

摘要

目的:探讨肥大细胞及TLR4在病毒性心肌炎发病及发展过程中的作用及其作用机制。
　　方法:以柯萨奇病毒B3腹腔注射BALB/C小鼠制作病毒性心肌炎模型(模型组，n=24)，不含病毒的Eagle's病毒稀释液腹腔注射BALB/C小鼠作为对照组（n=24），观察两组小鼠的一般情况变化，分别于制模后7天、14天、28天取心肌组织，行HE染色、Masson染色及透射电镜观察两组小鼠心肌病理改变情况，以甲苯胺蓝染色法和透射电镜检测两组小鼠各时间点心肌肥大细胞数目及脱颗粒情况，用RT-PCR及免疫组化法检测小鼠心肌TLR4的表达，将模型组各时间点肥大细胞数目与TLR4 mRNA表达进行相关性分析。
　　结果:1.病毒性心肌炎小鼠模型建立:小鼠腹腔注射CVB3后，出现掉毛、体重减轻等一般情况改变;HE染色显示心肌水肿、炎性细胞浸润明显，各时间点病理积分较对照组明显增高（P＜0.05）;Masson染色:模型组第28天心肌血管周围及心肌间质内大量蓝色胶原沉积，胶原容积分数增加，与第7天、第14天模型组及对照组比较差异均有统计学意义(all P＜0.05)。透射电镜下观察，模型组心肌排列紊乱，心肌细胞核变形。
　　2.肥大细胞数目及形态:甲苯胺蓝染色显示模型组各时间点心肌肥大细胞数目较对照组明显增多，差异有统计学意义(P＜0.05);透射电镜下可见模型组肥大细胞脱颗粒明显。
　　3.TLR4表达:免疫组化及RT-PCR结果显示模型组各时间点心肌TLR4的阳性表达面积及mRNA表达均高于对照组相应时间点，差异均有统计学意义(all P＜0.05);
　　4.相关性分析:模型组心肌肥大细胞数目和TLR4 mRNA表达具有正相关关系(R2=0.877，P＜0.05)。
　　结论:肥大细胞及TLR4在小鼠病毒性心肌炎的炎症反应、纤维化过程中均起重要作用;心脏肥大细胞和TLR4在小鼠病毒性心肌炎发病过程中可能起相互促进作用。

目录

声明

摘要

符号说明

1 前言

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物和病毒

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要仪器设备

2.2 实验方法

2.2.1 病毒的扩增、保存

2.2.2 实验模型的分组及建立

2.2.3 标本采集

2.2.4 病理学标本处理

2.2.5 肥大细胞甲苯胺蓝染色

2.2.6 免疫组化（ABC法）检测心肌TLR4的表达

2.2.7 RT-PCR法检测心肌TLR4的表达

2.3 数据处理和统计学分析

3 结果

3.1 病毒滴度测定

3.2 动物的一般情况

3.3 心肌组织病理改变

3.3.1 HE染色

3.3.2 心肌组织病理积分

3.3.3 Masson染色

3.3.4 电镜观察心肌超微结构改变

3.4 心脏肥大细胞密度及形态改变

3.4.1 甲苯胺蓝染色

3.4.2 透射电镜观察肥大细胞脱颗粒情况

3.5 免疫组化法检测TLR4的表达

3.6 RT-PCR检测TLR4 mRNA表达

3.6.1 RNA鉴定

3.6.2 心肌组织TLR4 mRNA表达

3.7 模型组小鼠心肌肥大细胞数目与TLR4 mRNA表达的相关性分析

4 讨论

4.1 病毒性心肌炎模型的建立

4.2 肥大细胞与病毒性心肌炎

4.3 TLR4与病毒性心肌炎

4.4 肥大细胞与TLR4表达的相关性

5 结语

参考文献

综述 TLR4与心血管疾病

在读期间的主要研究成果

致谢