维生素D核受体对2型糖尿病肾病患者炎症的影响研究

摘要

目的:通过对2型糖尿病（type2 diabetes mellitus，T2DM）患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)维生素D核受体(nuclear vitamin D receptor，nVDR)、外周血单个核细胞NF-κB及尿液趋化因子(MCP-1、RANTES)排泄率三者之间进行相关分析，探讨nVDR对2型糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy，DN)患者微炎症状态的影响。
　　方法:选取2型糖尿病患者113例，根据尿白蛋白/肌酐比值(urinary albumin-to-creatinine ratio，uACR)分为糖尿病正常白蛋白尿组(DN0组)38例、微量白蛋白尿组(DN1组)38例、大量白蛋白尿组（DN2组）37例，同期健康体检者30例作为正常对照组(NC组)。采用ELISA法检测尿液趋化因子MCP-1、RANTES水平，实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescence quota polymerasechain reaction，qRT-PCR)检测外周血单个核细胞VDR、NF-κB mRNA表达，Westem blotting检测外周血单个核细胞nVDR、NF-κB核蛋白表达，利用单因素方差分析、Pearson相关分析、多元逐步回归分析进行统计学分析。
　　结果:
　　1.DN2组、DN1组、DN0组、NC组尿液MCP-1/Cr水平分别为914.32±372.21 pg/mgCr、414.57±130.93 pg/mgCr、196.07±66.27 pg/mgCr、101.14±29.47 pg/mgCr，各组间比较差异均具有统计学意义;DN2组、DN1组、DN0组、NC组尿液中RANTES/Cr水平分别为652.50±293.98 pg/mgCr、327.47±191.88 pg/mg Cr、180.63±67.55 pg/mgCr、81.39±27.89 pg/mgCr，各组间比较差异均具有统计学意义。
　　2.尿液MCP-1/Cr、RANTES/Cr均与收缩压、尿素氮、血肌酐、uACR呈正相关，与估测肾小球滤过率(Estimated glomerular filtrationrate，eGFR)呈负相关;多元线性回归分析显示尿液MCP-1/Cr与uACR、eGFR独立相关，尿液RANTES/Cr与uACR独立相关。
　　3.DN2组、DN1组、DN0组VDR mRNA的相对表达明显低于NC组，DN2组、DN1组明显低于DN0组，差异均具有统计学意义。DN2组与DN1组比较差异无统计学意义;DN2组、DN1组、DN0组nVDR蛋白表达水平明显高于NC组，各组间比较差异均具有统计学意义。
　　4.VDRmRNA的表达与收缩压、空腹血糖、血肌酐、uACR、尿液MCP-1/Cr、尿液RANTES/Cr呈负相关，与eGFR呈正相关;nVDR蛋白表达水平与空腹血糖、血肌酐、uACR、尿液MCP-1/Cr、尿液RANTES/Cr呈负相关，与eGFR呈正相关;多元线性回归分析显示VDRmRNA表达与尿液MCP-1/Cr、RANTES/Cr独立相关。
　　5.DN2组、DN1组、DN0组NF-κ Bp65mRNA的相对表达明显高于NC组，DN2组明显高于DN1组及DN0组，差异均具有统计学意义，DN1组与DN0组比较差异无统计学意义。DN2组、DN1组、DN0组NF-κB p65核蛋白的表达明显高于NC组，DN2组明显高于DN0组，差异具有统计学意义。
　　6.NF-κBp65mRNA的相对表达与收缩压、血肌酐、uACR、尿液MCP-1/Cr、尿液RANTES/Cr呈正相关，与eGFR、VDRmRNA呈负相关;NF-κB p65核蛋白表达与收缩压、空腹血糖、uACR、尿液MCP-1/Cr、尿液RANTES/Cr呈正相关，与VDR蛋白表达呈负相关。多元线性回归分析显示NF-κ Bp65 mRNA表达与尿液MCP-1/Cr、VDRmRNA独立相关。
　　结论:
　　1.2型糖尿病肾病的发生发展与微炎症状态密切相关。
　　2.2型糖尿病肾病患者VDR表达下调，且与糖尿病肾病进展相关。
　　3.nVDR的下调可能通过过表达NF-κB p65引起炎症反应，进而参与糖尿病肾病的发生发展。

目录

声明

摘要

符号说明

1 前言

2 研究对象、材料与方法

2.1 研究对象

2.1.1 诊断标准

2.1.2 排除标准

2.1.3 实验分组

2.2 实验材料

2.2.1 临床及实验室检查

2.2.2 材料

2.3 实验方法

2.3.1 尿液中MCP-1、RANTES水平的检测

2.3.2 Real-time PCR检测VDR、NF-κBp65 mRNA的表达

2.3.3 细胞中核蛋白的提取及浓度测定

2.3.4 蛋白免疫印迹法测定VDR、NF-κBp65蛋白表达水平

2.4 统计学分析

3 实验结果

3.1 一般临床资料及生化指标结果

3.2 尿液MCP-1、RANTES排泄率检测结果

3.2.1 各组尿液MCP-1、RANTES排泄率

3.2.2 尿液趋化因子排泄率的相关性分析结果

3.2.3 尿液趋化因子排泄率各影响因素的多元线性回归分析

3.3 外周血单个核细胞VDR mRNA及蛋白的表达

3.3.1 各组VDRmRNA的表达

3.3.2 各组nVDR蛋白的表达

3.3.3 VDR表达水平的相关性分析结果

3.3.4 VDRmRNA表达水平各影响因素的多元逐步回归分析

3.4 外周血单个核细胞NF-κBp65mRNA及蛋白的表达

3.4.1 各组NF-κBp65mRNA的表达

3.4.2 各组NF-κBp65蛋白的表达

3.4.3 NF-κBp65表达水平的相关性分析结果

3.4.4 NF-κBp65mRNA表达水平各影响因素的多元逐步回归分析

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 维生素D及其受体对糖尿病肾病的保护作用

攻读硕士学位期间的研究成果

致谢