Sunitinib对EGF诱导的HaCaT细胞增殖与凋亡的影响及作用机制

摘要

目的:
　　研究受体酪氨酸激酶抑制剂sunitinib对EGF诱导的HaCaT细胞(HaCaT/E)增殖与凋亡的影响及内在机制。
　　方法:
　　1.采用细胞计数的方式检测EGF对HaCaT细胞增殖的影响;
　　2.采用MTT检测sunitinib对HaCaT/E细胞增殖的影响;
　　3.采用流式细胞仪检测sunitinib对HaCaT/E细胞周期，WesternBlot检测sunitinib对HaCaT/E细胞周期蛋白cyclinD1和cyclinE1的表达水平的变化;
　　4.采用流式细胞仪检测sunitinib对HaCaT/E细胞凋亡的影响，Western Blot检测sunitinib对HaCaT/E细胞凋亡相关蛋白cleaved-PARP表达水平的变化，电镜观察sunitinib对HaCaT/E细胞凋亡形态学的影响;
　　5.采用Western Blot检测sunitinib对HaCaT/E细胞Stat3信号途径的影响。
　　结果:
　　1.EGF呈时间依赖性的增加HaCaT细胞的数量，在3d的培养期间内，用10 ng/mL EGF处理的HaCaT细胞在各个时间点数量显著高于对照组细胞（P均＜0.05）;
　　2.MTT结果显示sunitinib抑制HaCaT/E细胞的增殖，并呈浓度及时间依赖性（P均＜0.05）;
　　3.Sunitinib呈浓度及时间依赖性降低HaCaT/E细胞S期的比例，并抑制细胞周期蛋白cyclinD1和cyclinE1的表达水平（P均＜0.05);
　　4.Sunitinib呈浓度及时间依赖性诱导HaCaT/E细胞的凋亡，凋亡相关蛋白cleaved-PARP的表达量随sunitinib浓度的增高而出现表达量上调(P＜0.05)，电镜显示sunitinib处理HaCaT/E细胞24h后出现细胞体积变小，核染色质边集，浓缩，细胞质空泡形成等一系列细胞凋亡征象;
　　5.Sunitinib预处理可显著抑制EGF诱导的HaCaT/E细胞p-Stat3蛋白的激活(P＜0.05)。
　　结论:
　　1.Sunitinib能抑制EGF诱导的HaCaT(HaCaT/E)细胞的增殖，诱导其凋亡。
　　2.Sunitinib可能通过Stat3信号途径介导细胞周期及凋亡相关蛋白表达而影响HaCaT/E细胞的增殖和凋亡。