高游离脂肪酸环境下GLP-1对内皮细胞NO生成的影响及机制

摘要

目的:研究胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide1，GLP-1)能否缓解棕榈酸(PA)导致的人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cell，HUVECs) NO生成受损，并初步探讨其作用机制。
　　方法:用不同浓度的PA(0，100μM，200μM，400μM，600μM)孵育HUVECs，硝酸酶还原法检测培养液NO浓度，Western Blot检测eNOS(Ser1177)的磷酸化水平，探讨可能引起HUVECs的NO生成明显受损的PA浓度。用不同浓度的GLP-1(0，1ng/ml，5ng/ml，10ng/ml)孵育HUVECs，检测培养液NO浓度，Western Blot检测eNOS(Ser1177)的磷酸化水平，摸索GLP-1的最佳有效浓度。用GLP-1干预PA孵育过的HUVECs，研究GLP-1能否缓解游离脂肪酸导致的HUVECs的NO生成受损，加或不加PI3K抑制剂，探讨其可能的作用机制。实验分组如下:①对照组用含1％BSA的培养液;②PA组加入400μMPA;③PA+GLP-1组加入400μM PA+1ng/ml GLP-1;④PA+GLP-1+LY294002组加入400μM PA+1ng/ml GLP-1+20μM PI3K抑制剂LY294002。各组取培养液测NO浓度，Western Blot检测Akt(Ser473)、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平。
　　结果:(1) HUVECs经浓度100μM、200μM、400μM、600μM的PA孵育后，随PA浓度升高，培养液NO浓度降低，eNOS(Ser1177)的磷酸化水平下降，PA浓度在200μM或以上时，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。(2) HUVECs经浓度1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的GLP-1孵育后，培养液NO浓度增高，eNOS(Ser1177)的磷酸化水平升高，在1ng/ml处最明显，与对照度相比差异有统计学意义(P＜0.05)。(3) HUVECs经对照组、PA组、PA+GLP-1组、PA+ GLP-1+LY294002组干预后，PA+GLP-1组的培养液NO浓度、Akt(Ser473)、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平较PA组均上升(P＜0.05)，但培养液NO浓度、Akt(Ser473)磷酸化水平仍低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05);PA+GLP-1+LY294002组的培养液NO浓度、Akt(Ser473)磷酸化水平低于PA+GLP-1组，但培养液NO浓度、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平仍高于PA组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:1、高游离脂肪酸可抑制eNOS的活性，减少血管内皮细胞NO的产生。2、正常情况下，GLP-1可上调eNOS活性，促进NO产生。3、GLP-1可部分逆转高FFAs造成的内皮损伤，PI3K-Akt-eNOS通路的上调可能参与这一过程。

目录

声明

摘要

英汉缩略词对照表

第一章 前言

第二章 材料和方法

2．1 材料

2．2 实验方法

第三章 实验结果

3．1 不同浓度PA对HUVECs的eNOS／NO的影响

3．2 不同浓度GLP-1对HUVECs的eNOS／NO的影响

3．3 高FFAs(PA 400μM)条件下GLP-1(1ng／ml)对HUVECs的eNOS／NO的影响及其可能的信号通路

第四章 讨论

第五章 结论

第六章 下一步研究方向

参考文献

综述 胰高血糖素样肽1促进血管内皮细胞NO的产生及其机制

致谢