HUCMSCs移植对大鼠亚急性脊髓损伤GAP-43和SPRR1A蛋白表达及神经功能的影响

摘要

目的：
　　观察人脐带源性间充质干细胞（Human Umbilical cord-derived Mesenchymal Stem Cells HUMSCs）移植治疗大鼠亚急性期脊髓损伤(spinal cord injury SCI)，对生长相关蛋白43（GAP-43）、小脯氨酸富含蛋白1A（SPRR1A）基因表达的影响，及促进神经功能恢复的情况，探讨脐带源性间充质干细胞治疗亚急性脊髓损伤的作用机制。
　　方法：
　　1.运用改良Allen氏打击器制备大鼠T10脊髓损伤模型，假手术组（行单纯全椎板切除、未损伤脊髓、未移植HUCMSCs）12只；单纯SCI组(行全椎板切除并用Allen氏打击器造成脊髓损伤，未移植HUCMSCs)20只；不同剂量干细胞移植组：1×106移植组（行全椎板切除并用Allen氏打击器造成脊髓损伤后移植1×106个HUCMSCs）20只；3×106移植组（行全椎板切除并用Allen氏打击器造成脊髓损伤后移植3×106个HUCMSCs）20只；5×106移植组（行全椎板切除并用Allen氏打击器造成脊髓损伤后移植5×106个HUCMSCs）20只。每组再随机分为移植术后第1、7、14、21天4个亚组，假手术组每个亚组3只大鼠,单纯SCI组、1×106移植组、3×106移植组、5×106移植组每个亚组5只大鼠。手术后第14天，1×106移植组、3×106移植组、5×106移植组经尾静脉注射HUCMSCs生理盐水悬液。
　　2.移植术后第1天、7天、14天、21天,应用BBB评分法评价各组大鼠运动功能的改善情况。
　　3.移植术后第1天、7天、14天、21天，应用免疫组织化学技术检测大鼠损伤脊髓GAP-43、SPRR1A基因的表达情况；移植术后7、14、21天，利用免疫荧光染色技术观察HUCMSCs在体内迁移和存活情况；移植术后21天，利用光镜及电子显微镜观察损伤脊髓组织形态学变化。
　　结果：
　　1.干细胞移植各组与单纯SCI组的运动功能均有不同程度的恢复，干细胞移植术后14天、21天干细胞移植组大鼠运动功能较单纯SCI组改善表现出明显差异（p＜0.01）；3×106移植组、5×106移植组较1×106移植组运动功能改善明显（P＜0.05）。
　　2.移植术后第7、14、21天脊髓损伤区组织中GAP-43、SPRR1A表达显示：干细胞移植组较单纯SCI组明显增高（p＜0.01）；3×106移植组、5×106移植组较1×106移植组GAP-43、SPRR1A表达阳性增高有明显差异（p＜0.05）。
　　3.移植术后第7、14、21天，免疫荧光观察到HUCMSCs在脊髓损伤区及其周围明显聚集并存活。
　　4.移植术后第21天，干细胞移植组损伤区脊髓结构与单纯SCI组相比，组织形态相对完整，3×106移植组、5×106移植组较1×106移植组组织形态更完整。
　　结论：
　　HUCMSCs静脉移植，有利于大鼠亚急性期脊髓损伤区脊髓结构的修复及其运动功能的恢复，可在宿主体内向损伤处脊髓组织迁徙、存活并改变脊髓损伤区的微环境，促进受损局部GAP-43、SPRR1A蛋白的表达。而且3×106个HUCMSCs移植是本次实验的最合理剂量。

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中英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

一 材料与方法

1 材料

2 方法

二 结 果

1 实验动物分析

2 运动功能检查结果

3 HE染色结果

4 免疫荧光技术观察结果

5 免疫组化法检测GAP-43的表达

6 免疫组化技术检测SPRR1A的表达

三 讨 论

1 脊髓损伤模型的建立

2 HUCMSCs移植对亚急性期脊髓损伤神经功能恢复的影响

3 HUCMSCs移植对脊髓损伤后GAP-43蛋白表达的影响

4 HUCMSCs移植对脊髓损伤后SPRR1A蛋白表达的影响

5 HUCMSCs移植治疗亚急性期脊髓损伤的可能机制

四 结 论

附图

参考文献

综述脐带源性间充质干细胞治疗脊髓损伤的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间撰写和发表的文章