miR-32靶向PTEN调控EMT促进宫颈癌细胞侵袭转移

摘要

目的：通过生物信息学软件分析，寻找能与PTEN基因结合的miRNAs，研究宫颈癌中miR-32与PTEN之间的关系，探讨miR-32靶向PTEN调控宫颈癌侵袭转移的分子机制。
　　方法：本研究首先通过生物信息学软件分析，寻找能与PTEN基因结合的miRNAs；进一步分析发现，其中，miR-32与PTEN结合特异性最好、稳定性最强。研究通过qRT-PCR检测miR-32、Western blot检测 PTEN及 EMT（上皮间质转化）相关蛋白在宫颈癌组织和癌旁宫颈组织中的表达，并分析miR-32表达与宫颈癌临床病理特征的关系；miR-32与PTEN结合位点验证：合成miR-32 mimics、inhibitors、阴性对照序列（NC），分别转染宫颈癌 Hela细胞，qRT-PCR检测miR-32在重组细胞株中的表达，Western blot检测PTEN及EMT相关蛋白表达；Transwell检测转染前后宫颈癌细胞转移能力变化，分析miR-32和PTEN表达及与EMT的关系。
　　结果：
　　（1）miR-32与PTEN的结合稳定性最好，特异性最强。
　　（2）宫颈癌组织中miR-32高表达，而癌旁组织中miR-32低表达；宫颈癌组织中PTEN低表达，而癌旁组织中高表达，差异均有显著性意义（P＜0.05）。
　　（3）miR-32的表达水平在低分化宫颈癌中高于中-高分化宫颈癌，在有淋巴结转移和远处转移宫颈癌患者中高于无转移的宫颈癌者(P<0.05)。
　　（4）Hela-miR-32 inhibitors细胞株中miR-32表达水平下调后，导致 PTEN表达水平增高， E-cadherin上调而 N-cadherin下调；Hela-miR-32 mimics细胞株中，提高miR-32表达水平后，PTEN蛋白水平下调, E-cadherin下调而N-cadherin上调。
　　（5） Hela-miR-32 inhibitors细胞株中侵袭细胞计数明显低于Hela、Hela-miR-NC；Hela-miR-32 mimics细胞株中侵袭细胞计数明显高于Hela、Hela-miR-NC，差异有显著性意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　（1）miR-32在宫颈癌中表达增高，与宫颈癌发生发展有关。
　　（2）miRNA-32下调PTEN蛋白表达，能促进宫颈癌Hela细胞的侵袭和转移。
　　（3）miRNA-32靶向 PTEN促进宫颈癌转移的分子机制可能与下调E-cadherin上调N-cadherin促进EMT有关。

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主要缩略英文索引

第1章 引 言

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.2 实验方法

第3章 结 果

3.1 miRWalk预测PTEN靶miRNAs

3.2 miRanda预测PTEN的最佳靶miRNA

3.3 miR-32的表达水平与宫颈癌临床病理的关系。

3.4宫颈癌组织与癌旁组织中miR-32和PTEN表达关系

3.5细胞转染情况

3.6 miR-32下调PTEN与EMT关系

3.7 miR-32下调PTEN促进宫颈癌侵袭转移

第4章讨论

4.1 PTEN与宫颈癌

4.2 miRNA与宫颈癌

4.3 EMT与宫颈癌

结论

参考文献

综述:MicroRNA在宫颈癌中的研究进展

攻读学位期间的科研成果

资助本课题的基金项目

致谢