Smad信号在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导尿道下裂大鼠阴茎中的作用

摘要

目的:
　　应用邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（di-(2-ethylhexyl) phthalate，DEHP）诱导下的尿道下裂大鼠模型，并初步探讨Smad2、Smad3和Smad7在DEHP诱导的尿道下裂大鼠阴茎中的作用
　　方法：
　　应用DEHP诱导建立尿道下裂大鼠模型。本次实验设立实验组、对照组两组。实验组于SD孕鼠孕期（gestation day，GD）12-19天（尿道发育的关键时期），每日上午定时经口灌胃给予溶入DEHP的大豆油（750mgDEHP/kg/day），对照组给以大豆油灌胃（1.5ml/day）。于GD20时将孕鼠剖宫产取出胎鼠。取雄性胎鼠整个生殖结节（genital tubercle GT）。通过免疫组织化学技术、实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR，qPCR）技术和蛋白免疫印迹（Western blot，WB）技术来测定两组胎鼠GT中Smad2、Smad3和Smad7的表达情况。
　　结果：
　　免疫组织化学的结果显示：实验组SD孕鼠孕期DEHP暴露后，尿道下裂胎的阴茎组织中Smad7和p-Smad2/3蛋白有丰富的表达。而对照组SD鼠正常胎鼠的阴茎组织中无表达。实时荧光定量PCR的结果显示：实验组SD孕鼠孕期DEHP暴露后，尿道下裂胎鼠的阴茎组织Smad2、Smad3和Smad7mRNA的表达较正常对照组SD孕鼠正常胎鼠的阴茎组织分别升高11.0%，55.5%和22.6%，有显著性统计学差异（P<0.05）。蛋白免疫印迹技术的结果显示：Smad2、Smad3和Smad7和p-Smad2/3蛋白在尿道下裂胎鼠阴茎组织中的表达高于正常胎鼠阴茎组织。
　　结论：
　　尿道下裂胎鼠的阴茎组织中Smads信号的mRNA及蛋白的表达相较于正常胎鼠的阴茎组织中的表达明显增加。推测受到雌激素类似物DEHP的干扰，雄激素受体（androgen receptor，AR）、雌激素受体（estrogen receptor，ER）的正常生理功能受影响，导致了Smad基因的表达增高，而 Smad蛋白的高表达会导致 c-Jun氨基末端激酶（c-Jun-NH(2)-terminal kinase，JNK）信号的异常激活，从而使得尿道细胞和包皮的迁移受到影响，最终导致尿道下裂的产生。

目录

声明

第一章 前言

第2章 材料与方法

2.1实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要器材

2.1.4 主要试剂的配置：

2.2实验方法

2.2.1实验动物的配种

2.2.2实验动物的染毒

2.2.3实验标本的收集

2.3 石蜡切片免疫组织化学

2.4 实时定量（real time PCR）检测各候选基因在各组中的表达

2.4.1引物设计

2.4.2步骤

2.5 Western blot 检测检测各基因在各组中的表达

2.5.1总蛋白的提取，收样：

2.5.2： WES上机

2.5.3： 数据分析

2.6 统计学分析

第3章 实验结果

3.1各型Smads蛋白在实验组与对照组胎鼠阴茎组织中的表达定位

3.2各型Smad基因在尿道下裂胎鼠的阴茎组织和正常胎鼠阴茎组织中的表达

3.2.1. Smad2在实验组及对照组胎鼠阴茎组织中的表达

3.2.2. Smad3在实验组及对照组胎鼠阴茎组织中的表达

3.2.3 Smad7 在实验组及对照组胎鼠阴茎组织中的表达

3.3尿道下裂胎鼠的阴茎组织和正常胎鼠阴茎组织中Smad 各亚型的蛋白表达量

第4章 讨论

第5章 实验结论

参考文献

综述:邻苯二甲酸二乙基己酯( DEHP) 对大鼠各系统影响研究进展

致谢