臭氧水疗治疗DNCB诱导的变应性接触性皮炎(ACD)样小鼠模型的研究

摘要

目的:
　　探索臭氧水疗是否能改善二硝基氯苯(DNCB)诱导的变应性接触性皮炎(ACD)样小鼠模型的症状及其可能机制，为治疗ACD的新方法和临床应用提供理论基础。
　　方法:
　　随机将60只BALB/c雄性小鼠分成模型组50只及对照组10只。模型组采用DNCB外涂小鼠背部皮肤制备ACD小鼠模型，对照组外涂等量丙酮+植物油混合液，造模结束后随机抽取模型组小鼠10只及对照组小鼠，通过皮损组织HE染色病理表现、电镜观察、酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清IgE、IL-4含量及实时定量PCR(real time PCR，RT-PCR)检测皮损IL-10、IL-17、IFN-γ mRNA水平，确定小鼠ACD样模型构建成功。将模型组剩余40只小鼠进行随机分组，分为臭氧水疗治疗组、纯净水治疗组、药物治疗阳性对照组、自然修复组，每组各10只。各组不同处理2周后，取静脉血及背部干预处全层皮肤组织。皮肤组织HE染色观察各组小鼠的皮肤组织病理改变;透射电镜观察各组小鼠皮肤棘层的变化;ELISA检测血清IgE、IL-4含量;RT-PCR检测皮损IL-10、IL-17、IFN-γ mRNA表达水平。
　　结果:
　　1)模型组小鼠背部皮肤均出现红斑、渗出、糜烂、增厚及明显的结痂现象，呈典型ACD临床表现。外涂丙酮+植物油的对照组小鼠皮肤与实验前相比较无明显改变，根据组织病理变化、电镜观察及细胞因子IgE、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ变化说明构建ACD样小鼠模型成功。
　　2)各组进行不同干预2周后，与自然修复组相比较，臭氧水疗治疗组和药物治疗组小鼠皮损渗出减少，红斑明显消退，搔抓次数明显减少，肉眼观皮损明显好转;HE染色均可以观察到角质层明显变薄。而纯净水治疗组及自然修复组小鼠，皮损处红斑肥厚，痂皮未脱落，HE染色与模型组相比未见明显改变。透视电镜下显示臭氧水疗治疗组棘层染色质无边集，线粒体形态结构完整，无肿胀现象，脊线清晰;药物治疗阳性对照组线粒体形态完整，无破裂、肿胀、空泡化，核仁明显;纯净水治疗组核仁不明显，线粒体空泡化，脊线消失;自然修复组细胞核形态不规则，线粒体空泡化严重，脊线消失，并伴随轻微肿胀。
　　3)各组进行不同干预2周后，与自然修复组相比较，臭氧水疗治疗组、药物治疗组小鼠血清中的IgE水平明显较低，差异有统计学意，;与自然修复组相比较，臭氧水疗治疗组、药物治疗阳性对照组小鼠血清中的IL-4水平明显较低，差异有统计学意义;
　　4)各组进行不同干预2周后，臭氧水疗治疗组小鼠皮肤组织中IL-10 mRNA表达水平与自然修复组相较显著降低，差异有统计学意义;臭氧水疗治疗组小鼠皮肤组织中IL-17 mRNA表达水平与自然修复组相较显著降低，差异有统计学意义;IFN-γ mRNA表达水平与自然修复组相较显著升高，差异有统计学意义。
　　结论:
　　1.DNCB致敏BALB/c小鼠可成功构建变应性接触性皮炎模型;
　　2.臭氧水疗可促进ACD样小鼠皮损的恢复;
　　3.臭氧水疗可能通过调控IL-4、IL-10等细胞因子从而调控T细胞间的平衡发挥治疗ACD的作用。

目录

摘要

英文缩写词表

第一章 前言

2．1．1 实验动物

2．1．1 主要试剂及药品

2．1．2 主要实验仪器及器械

2．2 实验方法

2．2．1 建立ACD样小鼠模型

2．2．2 分组及处理

2．2．3 小鼠血标本收集

2．2．4 皮肤组织病理切片的制作

2．2．5 皮肤组织电镜标本的制作

2．2．6 BALB／c小鼠血清IgE、IL-4水平测定方法

2．2．7 BALB／c小鼠皮肤组织IL-10、IL-17、IFN-γ mRNA表达测定方法

2．3 统计学分析

第三章 结果

3．1 DNCB诱导BALB／c雄性小鼠ACD模型组与外涂丙酮+植物油对照组比较

3．1．1 模型组与对照组皮损比较

3．1．2 模型组与对照组HE染色组织病理改变比较

3．1．3 模型组与对照组皮肤电镜下改变比较

3．1．4 模型组与对照组血清IgE、IL-4比较

3．2 臭氧水疗治疗组、药物治疗阳性对照组、纯净水治疗组与自然修复组比较

3．2．2 臭氧水疗治疗组、药物治疗阳性对照组、纯净水治疗组与自然修复组HE染色组织病理改变比较

3．2．3 臭氧水疗治疗组、纯净水治疗组、药物治疗阳性对照组与自然修复组电镜下比较

3．2．4 臭氧水疗治疗组、纯净水治疗组、药物治疗阳性对照组、自然修复组血清IgE、IL-4比较

3．2．5 臭氧水疗治疗组、纯净水治疗组、药物治疗阳性对照组、自然修复组皮肤组织中IL-10、IL-17、IFN-γ mRNA表达水平比较

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述 变应性接触性皮炎的发病机制概述

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文及参与课题

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