疏血通与阿司匹林合用对大鼠脑缺血/再灌注损伤的药效学研究

摘要

目的:利用大鼠脑缺血再灌注损伤模型，探索疏血通与阿司匹林合用对脑缺血再灌注损伤的协同保护作用，并初步阐明疏血通与阿司匹林合用对脑缺血再灌注损伤的作用机制，为临床联合用药治疗缺血性脑卒中提供理论基础和实验依据。
　　方法:1.将200只雄性SD大鼠随机分为5组，每组40只，分别为:假手术组、大脑中动脉栓塞再灌注(MCAO/R)模型组、疏血通(0.6 mL/kg)组、阿司匹林(10 mg/kg)组、疏血通(0.6 mL/kg)+可司匹林(10m g/kg)组。2.采用线栓法制作大脑中动脉栓塞再灌注(MCAO/R)模型，术后2h进行再灌注，24 h后按照Longa的5级评分方法进行神经功能缺损评分，干湿重法测定脑组织含水量，TTC染色测定脑梗塞体积。3.各组大鼠腹主动脉取血，检测血小板聚集率、凝血四项和纤溶因子。4.取梗死侧大脑皮层，采用ELISA法检测神经递质。5.采用ELISA试剂盒测定各组大鼠血清、大脑皮层和海马组织中促炎症因子IL-1β、IL-6、ICAM-1、MCP-1和TNF-α，抗炎症因子IL-4、IL-10，以及血清中CD61和CD62p的表达水平。6.通过Western blot实验检测各组大鼠大脑皮层组织中核内和胞浆的NF-κB以及HMGB-1、TLR-4和I-κB等蛋白的表达情况。
　　结果:1.发生脑缺血再灌注损伤后，MCAO/R大鼠神经功能缺损，脑水肿、脑梗死和脑组织损伤，血小板最大聚集率显著增加(P＜0.01)。疏血通与阿司匹林合用能够显著改善MCAO/R大鼠神经功能的缺损(P＜0.01)，显著减少脑水肿、脑梗死体积（P＜0.05），降低血小板最大聚集率并改善凝血四项和纤溶系统。2.发生脑缺血再灌注损伤后，模型组大鼠血清、大脑皮层和海马组织中的促炎症因子IL-1β、IL-6、MCP-1和TNF-α，抗炎症因子IL-4、IL-10的含量均显著增加(P＜0.01)，血清中HMGB-1、ICAM-1、CD61和CD62p的水平也显著升高(P＜0.01)。与模型组相比，各给药组均能显著降低促炎症因子IL-1β、IL-6、MCP-1和TNF-α的含量(P＜0.05），血清中ICAM-1、CD61和CD62p的水平也不同程度降低，而抗炎症因子IL-4、IL-10的表达显著增加(P＜0.05）。与疏血通及阿司匹林单用组相比，疏血通与阿司匹林合用组的作用效果优于单用组。3.发生脑缺血再灌注损伤后，模型组大鼠大脑皮层组织中的HMGB-1与TLR-4表达水平显著升高(P＜0.01);I-κBα表达显著降低，NF-κB被激活，发生核转位，NF-κB表达也随之增加。与模型组相比，各给药组均能显著地降低HMGB-1、TLR-4的蛋白表达水平(P＜0.05），提高I-κ Bα蛋白表达(P＜0.01)，降低NF-κB的表达水平，抑制NF-κB信号通路的激活，减少炎症因子的产生，从而抑制脑缺血再灌注损伤。与疏血通及阿司匹林单用组相比，疏血通与阿司匹林合用组的作用效果优于单用组。
　　结论:疏血通与阿司匹林合用能够有效降低MCAO/R大鼠神经损伤，抑制血小板活化，调节血小板最大聚集率，改善凝血功能和纤溶系统。疏血通与阿司匹林合用能够抑制炎症反应，可能通过TLR-4/HMGB-1/NF-kB途径调控。

目录

声明

摘要

缩略语表

前言

第一章 文献综述

1．1 试剂

1．2 药品

1．3 仪器

1．4 实验动物

1．5 主要溶液配制

2 实验方法

2．1 动物分组及给药

2．2 大脑中动脉阻塞(MCAO／R)模型制备

2．3 神经功能评价

2．4 脑组织含水量测定

2．5 脑梗塞体积测定

2．6 神经递质水平的检测

2．7 数据处理

3 结果

3．1 动物体重

3．2 疏血通与阿司匹林合用对神经功能缺损的影响

3．3 疏血通与阿司匹林合用对脑含水量的影响

3．4 疏血通与阿司匹林合用对脑梗死体积的影响

3．5 疏血通与阿司匹林合用对脑内神经递质水平的影响

4 讨论

5 小结

1．1 试剂

1．2 药品

1．3 仪器

1．4 实验动物

1．5 主要溶液配制

2 实验方法

2．1 动物分组及给药

2．2 大脑中动脉阻塞(MCAO／R)模型制备

2．4 凝血纤溶指标及血小板活化指标检测

2．5 血小板最大聚集率测定

2．6 数据处理

3 结果

3．1 疏血通与阿司匹林合用对凝血及纤溶系统的影响

3．2 疏血通与阿司匹林合用对血小板的影响

4 讨论

5 小结

1．1 试剂

1．2 药品

1．3 仪器

1．4 实验动物

1．5 主要溶液配制

2 实验方法

2．1 动物分组及给药

2．2 大脑中动脉阻塞(MCAO／R)模型制备

2．3 Western blot检测蛋白表达

2．5 炎症因子检测

3 结果

3．1 疏血通与阿司匹林合用对大脑皮层HMGB-1与NF-κB蛋白表达的影响

3．2 疏血通与阿司匹林合用对血清中炎症因子的影响

3．3 疏血通与阿司匹林合用对大脑皮层中炎症因子的影响

3．4 疏血通与阿司匹林合用对海马组织中炎症因子的影响

4 讨论

5 小结

结语

致谢

参考文献