细胞穿膜肽Scp01-b穿膜效率及其介导质粒转染细胞的实验研究

摘要

目的：
　　细胞穿膜肽(Cell Penetrateing Peptide,CPPs)是一类新式非病毒基因载体。Scp01-b是结合课题组前期研究成果及最新研究进展设计、合成一种新的细胞穿膜肽。本实验旨在研究细胞穿膜肽Scp01-b穿膜效率及检测Scp01-b介导pcDNA3.1-EGFP质粒DNA转染细胞的效率，为更好地利用Scp01-b这一新型细胞穿膜肽递送工具提供更多理论支持。
　　方法：
　　(1)从CPPs肽库中筛选并设计出实验所用肽序列，分别合成带有荧光标记的Scp01-b-FITC、NCO-FITC等短肽。将Scp01-b、NCO等与细胞体外共孵育，荧光标记定位分析细胞内荧光分布，荧光酶标仪定量分析细胞内的荧光量，并检测Scp01-b在不同条件下细胞内荧光量的变化。
　　(2)通过红细胞裂解实验、乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测Scp01-b对细胞膜完整性的影响，通过MTT实验检测Scp01-b对细胞增殖的影响。
　　(3)按照肽-质粒不同的氮-磷比值，使一定量肽与pcDNA3.1-EGFP质粒混合并转染细胞，并检测质粒在细胞内的表达情况。
　　结果：
　　(1)不同浓度的Scp01-b均能穿透细胞膜进入细胞内部，且分布于胞浆与胞核，细胞内荧光量随着浓度增加而增多。
　　（2）Scp01-b穿膜效率在一定时间范围内（0.5 h-2.0 h），细胞内荧光量随着随着时间延长而增多。
　　（3）Scp01-b的穿膜作用没有细胞选择特异性，且Scp01-b穿膜效率受到多种因素影响，10％DMSO可以明显提高Scp01-b的穿膜效率，0.6M蔗糖、葡萄糖对Scp01-b的穿膜效率提高不明显；低温可以抑制Scp01-b的穿膜效率；Scp01-b的穿膜作用对细胞膜完整性及细胞活性没有明显影响。
　　4、血清的存在可以抑制Scp01-b的穿膜效率，CPPs穿膜抑制剂肝素、MβCD可以抑制Scp01-b的穿膜效率，而NaN3、NH4Cl对Scp01-b的穿膜效率抑制不显著。
　　5、Scp01-b可以介导pcDNA3.1-EGFP质粒转染进入细胞。
　　结论：
　　1、Scp01-b是一种新型具有较高穿膜效率的细胞穿膜肽，研究结果提示其可能是通过内吞途径进入细胞；
　　2、Scp01-b穿膜效率受到包括血清、温度、DMSO以及多种抑制剂的影响；
　　3、Scp01-b与质粒在一定氮磷比条件下可以介导质粒转染进入细胞，且转染效率受到氮磷比影响。

目录

声明

英文缩略词表

引言

材料与方法

1.1 材料

1.2 实验方法

结果

第一部分 生物信息学分析

第二部分 Scp01-b穿膜效率实验研究

第三部分Scp01-b介导质粒转染细胞实验研究

讨论

1.CPPs与生物信息学

2.CPPs穿膜特性

3.CPPs与核酸递送

结论

参考文献

综述:细胞穿膜肽穿膜机制的研究进展

后记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著