五指山小型猪SLA-DQA基因的SNPs及猪人MHCⅠ类区自然杀伤细胞KIRs结合区氨基酸变异的比较分析

摘要

异种器官移植一直被认为是解决人体移植器官供体匮乏问题的方法。随着转基因及基因双敲除猪的相继问世，对异种移植的发展产生了巨大的推动作用。MHC编码移植抗原，控制移植排斥反应，参与免疫应答调控和免疫识别，是移植物在受体内能否成活的关键。鉴于此，该实验首次比较详细的完成了五指山小型猪群体中几个经典的SLA基因的SNPs检测，并对五指山小型猪—人异种移植免疫进行初步的研究，获得的结果如下： (1)采用PCR-SSCP结合克隆测序技术，检测五指山猪群体中SLA-DQA，DQB第二外显子的多态性。结果发现SLA-DQA第二外显子存在碱基的颠换(A/C)，引起氨基酸的改变(K/Q)；而SLA-DQB第二外显子区域没有发现多态。 (2)利用AS-PCR技术对SLA-DQA进行准确分型。设计等位基因序列特异性引物直接从DNA水平上对存在多态的SLA-DQA基因进行分型，并取得了满意的效果，与测序结果100％相符。 (3)依据猪EST所构建的EST重叠群，设计的猪特异引物分离并鉴定五指山猪群体中SLA-1，SLA-2基因第二和第三外显子的多态性。在五指山猪群体中SLA-1，SLA-2基因分别存在两个等位基因，并且这两个基因多肽结合区与人相应部分氨基酸序列间均存在50％～55％的同源性。 (4)对五指山猪群体中SLAⅠ类基因核苷酸序列系统数分析，发现与SLA-3基因相比，SLA-1、SLA-2基因间存在较高的同源性。 (5)将猪SLAⅠ类基因与人HLAⅠ类基因NK细胞杀伤抑制受体结合区相应氨基酸进行了比较分析，结果发现它们都存在一个以上氨基酸的差异，这使得它们与NK细胞杀伤抑制受体基本上很难结合。

目录

论文说明：资助

1文献综述

1.1猪MHC的研究进展

1.1.1 SLA基因结构

1.1.2 SLA基因的遗传特点

1.1.3 SLA的分型方法

1.1.4 MHC的功能

1.1.5 MHC在异种移植中的作用

1.2器官异种移植

1.2.1异种移植简介

1.2.2异种移植存在的问题及前景展望

2研究的目的和意义

3材料与方法

3.1材料

3.1.1样品

3.1.2培养基、酶及试剂盒

3.1.3菌株

3.1.4主要试剂及配制

3.1.5主要仪器设备

3.1.6主要分子生物学软件

3.2方法

3.2.1五指山小型猪SLA-DQ基因的SNPs检测与分型方法

3.2.2五指山小型猪SLA Ⅰ类基因中SLA-1，2基因多肽结合区(第2及第3外显子)的SNPs检测

4结果

4.1 SLA-DQA多态性检测与分型结果

4.1.1 SLA-DQA基因的分离

4.1.2 SLA-DQA的多态性检测

4.1.3 SLA-DQA测序结果

4.1.4 SLA-DQA的分型

4.2五指山小型猪SLA-DQB的多态性检测

4.2.1 SLA-DQB基因的分离

4.2.2 SLA-DQB多态性检测

4.2.3 SLA-DQB基因的克隆测序结果

4.2.4 SLA-DQA，DQB多肽结合区的抗原性及疏水性分析

4.3五指山小型猪经典的SLA Ⅰ类基因(SLA-1，SLA-2)的多态性检测与遗传方式分析结果

4.3.1五指山小型猪SLA-1基因的多态性检测与遗传方式分析

4.3.2 SLA-2基因多态性检测与遗传方式分析

4.3.3五指山小型猪SLA Ⅰ类基因与人HLA Ⅰ类基因多态结合区氨基酸的比较分析

4.3.4 SLA Ⅰ类基因与HLA Ⅰ类基因NK细胞杀伤抑制受体结合区重要氨基酸的比较分析

5讨论

5.1关于基因的分离

5.2关于SNP检测

5.3关于系统发生树

5.4关于AS-PCR分型

5.5关于五指山猪与人MHC Ⅰ类基因多肽结合区氨基酸的比较分析

5.6关于SLA Ⅰ类基因与HLA Ⅰ类基因NK细胞杀伤抑制受体结合区重要氨基酸的比较分析

6小结

6.1本研究获得的成果

6.2本研究的创新点与特色

6.3本研究的不足之处与对下一步研究的建议

6.3.1本研究的不足之处：

6.3.2下一步研究的建议：

缩略词表

参考文献

致谢