天蓝色链霉菌A3（2）中bldA依赖性突变的遗传定位及克隆初探

摘要

bldA编码天蓝色链霉菌A3（2）中识别UUA密码子的tRNA，大部分菌株的营养生长不需要bldA功能。bldA突变菌株中含TTA密码子的抗生素抗性基因、抗生素调节基因仍有表达，暗示存在一个替代bldA tRNA翻译UUA密码子的机制。天蓝色链霉菌A3（2）M145菌株发生了突变，使bldA成为必需基因。将突变基因命名为bldA依赖性突变（bldA-dependent mutation, bad-），其等位基因命名为bad<’＋>。本研究试图定位bad-突变，克隆bad<’＋>基因，揭示替代bldA tRNA翻译UUA密码子的途径。 为了遗传定位bad-突变，以M145和1258等菌株为亲本，通过3轮杂交筛选构建了菌株LY3。用LY3与1258杂交，筛选了217株重组子并鉴定其基因型。对217株重组子的基因型进行遗传分析，将bad-突变定位于天蓝色链霉菌A3（2）染色体SCO3934与SCO4659基因之间的758 kb区域。 尝试使用鸟枪法从bad<’＋>菌株天蓝色链霉菌A3（2）M600中随机克隆bad<’＋>基因。整个鸟枪克隆实验得到约21,800株转化子，筛选获得2株具有Km<’S>Apr<’R>Thio<’R>及“光秃”表型的转化子，PCR检测表明其中的bldA已被中断。但是，测定2个重组质粒的插入片段没有发现相互重叠区；而且，提取2株重组质粒重转化到M145：：SCE25AT中，分别得到5，000株Thio<’R>转化子，但没有得到Km<’S>Apr<’R>及“光秃”表型的转化子。这些结果暗示bad<’＋>基因可能位于相对大的操纵子中，必需采用容量更大的载体，结合遗传定位的信息进行克隆。

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摘要

缩略语

1文献综述

2材料与方法

3结果与分析

4总结与展望

参考文献

致谢