鸡场土壤中H9亚型禽流感病毒的检测与化学消毒剂的筛选

摘要

我国是一个养禽大国，养鸡量位居世界第一。随着养殖量的不断增长，集约化养殖势必给外界环境造成不良影响。因此，一旦养鸡场土壤被污染，其理化性质将会改变，随着病毒在土壤中的不断扩散，不仅会破坏土壤的正常功能，也会进一步污染地下水，对人类健康构成威胁。目前，采用绿色消毒剂对污染土壤的修复等研究相继出现，污染土壤的修复已成为新的研究热点。为此本研究选取H9亚型禽流感病毒为代表，首先建立了检测土壤中H9亚型禽流感病毒的检测方法，然后对相关的消毒剂进行了消毒试验，以有效控制鸡场土壤环境中H9亚型禽流感病毒的污染。
　　 1.建立了土壤中H9亚型禽流感病毒的反转录巢式PCR检测方法。本研究选择H9亚型禽流感病毒HA基因为检测靶标，通过设计两对特异性引物，建立了反转录巢式PCR检测方法。对土壤中H7亚型禽流感病毒、新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒进行反转录巢式PCR检测，未发现非特异性扩增，表明该方法具有良好的特异性。敏感性试验结果表明其检测灵敏度为0.5TCID50/g。添加H9亚型禽流感病毒至土壤进行病毒存活时间的检测试验，在病毒污染土壤后的第5天仍能检测到。上述结果表明所建立的反转录巢式PCR检测方法是一种特异性高、敏感性强的快速检测方法。
　　 2.应用戊二醛和二氧化氯两种消毒剂对土壤中H9亚型禽流感病毒的杀灭效果进行了评价。两种消毒剂对土壤中H9亚型禽流感病毒的杀灭试验结果表明，两种消毒剂具有较强的杀灭效果，与对照组相比较差异极显著(P<0.001)。戊二醛对以土壤为载体的消毒试验结果表明：0.075%的戊二醛作用5min、0.05%的戊二醛作用10min对H9亚型禽流感病毒的杀灭率达100%。在戊二醛对H9亚型禽流感病毒的田间消毒试验中，0.2%戊二醛作用24h、0.1%戊二醛作用48h对H9亚型禽流感病毒的杀灭率均达到100%；二氧化氯做为消毒剂对以土壤为载体的消毒试验结果表明，300mg/L二氧化氯作用2h对H9亚型流感病毒的杀灭率达到100%。在二氧化氯对H9亚型禽流感病毒的田间消毒试验中，500mg/L二氧化氯作用12h、300mg/L二氧化氯作用24h对H9亚型禽流感病毒的杀灭率均达到100%。研究结果表明：作为土壤消毒剂戊二醛和二氧化氯对被H9亚型禽流感病毒污染的土壤具有良好的消毒效果。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

第一章 文献综述

1.禽流感研究进展

1.1.禽流感概述

1.2.禽流感病毒的检测

1.3.禽流感病毒的防控

2.养殖场污染研究进展

2.1.养殖场对空气的污染状况

2.2.养殖场对水体的污染状况

2.3.养殖场对土壤的污染状况

3.化学消毒剂研究进展

3.1.常用化学消毒剂类型

3.2.针对禽流感病毒的化学消毒剂

3.3.化学消毒剂的发展趋势

第二章 研究的目的与意义

第三章 土壤中H9亚型禽流感病毒的检测

1.研究目的和意义

2.材料与方法

2.1.材料

2.2.方法

3.结果与分析

3.1.巢式PCR产物检测结果

3.2.巢式PCR退火温度的优化结果

3.3.土壤中H9亚型禽流感病毒反转录巢式PCR检测方法的建立结果

3.4.土壤中H9亚型禽流感病毒反转录巢式PCR检测方法的特异性试验结果

3.5.土壤中H9亚型禽流感病毒反转录巢式PCR检测方法的敏感性试验结果

3.6.土壤中H9亚型禽流感病毒存活时间的检测试验结果

4.讨论

5.小结

第四章 化学消毒剂对土壤中H9亚型禽流感病毒的消毒试验

1.研究目的和意义

2.材料与方法

2.1.材料

2.2.方法

2.3.中和剂鉴定试验

2.4.土壤为载体消毒试验

2.5.H9亚型禽流感病毒的田间消毒试验

3.结果与分析

3.1.中和剂鉴定结果

3.2.以土壤为载体的消毒试验结果

3.3.田间消毒试验结果

4.讨论

4.1.中和剂鉴定试验

4.2.以土壤为载体的消毒试验

4.3.田间消毒试验

5.小结

结 论

参考文献

致谢