不同氨基酸水平对斑马鱼精子活力的影响及机制的初步研究

摘要

精子活力是精子质量的重要标准。精子活力越高，精子受精率越高，因此精子活力的改善能够更好的满足生产实践育种工作。本实验以不同的单一氨基酸对雄性斑马鱼进行短期培育观察其精子活力变化，并通过Western blot分析精子活力改善的潜在机制，为进一步探讨养殖亲本精子活力变化影响因素，从而能在生产实践亲本繁育工作中带来更多的效益。
　　主要研究结果如下：
　　1.不同单一氨基酸注射及活力分析
　　不同氨基酸(异亮氨酸(Ile)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Try)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、缬氨酸(Val)、甲硫氨酸(Met)、半胱氨酸(Cys)、精氨酸(Arg)、丝氨酸(Ser)、赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)、亮氨酸(Leu)、谷氨酸(Glu)、亮\色氨酸(Leu\Try))溶液对雄性性成熟斑马鱼进行短期腹腔注射培育，通过精子动力分析仪观察其精子活力变化。研究结果发现，与不同氨基酸水平相比，亮氨酸、色氨酸及其混合注射短期培育组均能够显著提高精子活力(P<0.05)。
　　2.精子活力改善的潜在机制初步研究
　　PI3K/Akt信号通路研究表明，与对照组相比，亮氨酸、色氨酸以及PI3K激活剂IGF-1短期培育组精子活力显著提高(P<0.05)，Western blot检测表明p-Akt水平均明显上升(P<0.05)。PI3K抑制剂 LY294002短期培育组精子活力有所下降，Western blot检测也表明 p-Akt水平明显下调(P<0.01)；与对照组相比，亮氨酸与 PI3K抑制剂LY294002混合培育组 p-Akt水平又有所上升(P<0.01)，而色氨酸与 PI3K抑制剂LY294002混合培育组p-Akt水平虽有所下降(P<0.01)，但比单独PI3K抑制剂LY294002短期培育组有所上升。以上结果暗示亮氨酸、色氨酸均能够通过PI3K/Akt信号通路参与精子质量的改善。

目录

声明

缩略语表

第一章 前言

1鱼类精子活力概述

2 精子活力影响的研究进展

3潜在的机制Wnt、PI3K信号通路初步探究

3.1 Wnt/β-Catenin信号通路的研究概况

3.2 PI3K/Akt信号通路的研究概况

4研究的目的与意义

第二章 材料和方法

1实验材料

1.1氨基酸溶液的配制及保存

1.2实验用鱼

1.3实验设计

2 实验主要试剂及仪器

2.1主要仪器设备

2.2主要试剂盒及药品

2.3主要试剂配制

3 实验方法

3.1 斑马鱼精子活力测试

3.2 Western blot检测短期培育组中精巢p-Akt表达水平

3.3 结果数据分析

第三章 结果与分析

1 不同氨基酸溶液腹腔注射对斑马鱼精子活力的影响

1.1极性中性氨基酸短期培育对斑马鱼精子活力的影响

1.2酸碱性氨酸短期培育对斑马鱼精子活力的影响

1.3非极性氨基酸短期培育对斑马鱼精子活力的影响

1.4亮氨酸/色氨酸溶液短期培育对斑马鱼精子活力的影响

2 Western blot检测亮氨酸、色氨酸短期培育组内p-Akt蛋白表达水平及定量

2.2 Western blot 检测色氨酸短期培育组内p-Akt蛋白表达水平及定量

3 PI3K激活剂IGF-1/抑制剂LY294002对精子活力的影响

3.1 PI3K抑制剂LY294002对精子活力的影响

3.2 PI3K激活剂IGF-1对精子活力的影响

4 Western blot检测PI3K激活剂/抑制剂及亮、色氨酸混合短期培育组内p-Akt蛋白表达水平及定量

4.1 Western blot 检测 PI3K 抑制剂及与色氨酸混合短期培育组内p-Akt蛋白表达水平及定量

4.2 Western blot检测PI3K激活剂和抑制剂与亮氨酸混合短期培育组内p-Akt蛋白表达水平及定量

第四章 讨论

1 不同单一氨基酸溶液短期培育对斑马鱼精子活力的影响

2 初步机制研究

参考文献

致谢