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摘 要
Abstract
第一章 文献综述
1 犬腺病毒病的流行病学
2 犬腺病毒病的病理变化
3 犬腺病毒病的鉴别诊断
3.1 病毒的分离和鉴定
3.2 血清学诊断
3.3 分子生物学诊断
4 犬腺病毒病的防治
第二章 犬腺病毒2型（NJ-C株）的分离与鉴定
2.1 材料
2.1.1 病料
2.1.2 细胞
2.1.3 培养基和试剂
2.1.4 实验动物
2.2 方法
2.2.1 病毒分离
2.2.2 病毒含量测定
2.2.3 PCR鉴定
2.2.3.1 引物的设计与合成
2.2.3.2 模板的制备
2.2.3.3 PCR反应体系
2.2.3.4 PCR产物回收及测序
2.2.3.5 序列分析
2.2.4 特异性鉴定
2.2.5 电镜观察
2.2.6 纯净性检验
2.2.6.1 无菌检验
2.2.6.2 支原体检验
2.2.6.3 外源病毒检验
（1）样品的接种与培养
（2）判定
（3）检查方法
a. 荧光抗体检查法
b. 致细胞病变检查法
2.2.7 毒力试验
2.3 结果
2.3.1 病毒的分离
2.3.2 病毒含量测定结果
2.3.3 PCR鉴定结果
2.3.4 特异性鉴定结果
2.3.5 电镜观察结果
2.3.6 纯净性检验结果
2.3.6.1 无菌检验结果
2.3.6.2 支原体检验结果
2.3.6.3 外源病毒检验结果
（1）样品的接种与培养
（2）荧光抗体检查法
（3）致细胞病变检查法
（4）红细胞吸附检查法
2.3.7 毒力试验结果
2.4 小结
第三章 抗犬腺病毒2型单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
3.1 材料
3.2 方法
3.2.1 CAV2免疫原的制备
3.2.2 动物免疫
3.2.3 细胞融合
3.2.4 纯净性检验
3.2.4.1 无菌检验
3.2.4.2 支原体检验
3.2.4.3 外源病毒检验
（1）样品的接种与培养
（2）判定
（3）检查方法
a. 荧光抗体检查法
b. 致细胞病变检查法
c. 红细胞吸附性检查法
3.2.5 细胞的鉴别试验
3.2.6 培养特性
3.2.7 胞核学检查
3.2.8 分泌抗体活性检测
3.2.9 单克隆抗体的制备及检测
3.2.9.1 单克隆抗体的制备
3.2.9.2 腹水抗体效价检测
3.2.9.3 单克隆抗体的纯化
3.2.9.4 抗体特异性检测
3.2.9.5 类及亚类测定
3.2.9.6 抗体蛋白浓度测定
3.3 结果
3.3.1 杂交瘤细胞阳性克隆株筛选结果
3.3.2 纯净性检验结果
3.3.3 细胞鉴别试验结果
3.3.4 培养特性
3.3.5 细胞核学检查结果
3.3.6 分泌抗体活性检测结果
3.3.7 单克隆抗体腹水效价检测结果
3.3.8 单克隆抗体的纯化结果
3.3.9 抗体的特异性检测结果
3.3.10 类和亚类检验结果
3.3.11 纯化抗体蛋白含量检测结果
3.4 小结
第四章 犬腺病毒2型胶体金检测试纸条方法的建立
4.1 材料和仪器
4.2 方法
4.2.1 胶体金颗粒大小的选择
4.2.2 胶体金标记的最佳pH值的确定
4.2.3 胶体金溶液的最佳标记量的确定
4.2.4 免疫层析法的建立
4.2.4.1 检测线抗体和质控线抗体包被浓度的确定
4.2.4.2 金标垫的处理
4.2.4.3 金标垫的制备
4.2.4.4 样品垫的处理
4.2.4.5 试纸条的组装
4.2.5 样本检测原理与结果判定
4.2.6 特异性检验
4.2.7 敏感性检验
4.2.8 重复性检验
4.2.9 稳定性试验
4.2.10 临床适用性检验
4.2.11 对比进口同类产品符合率
4.3 结果
4.3.1 胶体金的制备
4.3.2 胶体金标记的最佳pH值测定
4.3.3 胶体金溶液的最佳标记量的确定
4.3.4 检测线抗体和质控线羊抗小鼠IgG包被浓度的确定
4.3.5 结果判定
4.3.6 特异性试验结果
4.3.7 敏感性试验结果
4.3.8 重复性试验结果
4.3.9 稳定性试验结果
4.3.10 临床适用性试验结果
4.3.11 对比进口同类产品符合率
4.4 小结
第五章 讨论
5.1 犬腺病毒2型NJ-C株的分离与鉴定
5.2 单克隆抗体的筛选
5.3 犬腺病毒2型胶体金检测试纸条
第六章 结论
参考文献
致 谢
