用于防龋DNA疫苗粘膜给药的阳离子脂质体载体的研究

摘要

基因治疗成功的关键是需要高效、安全和靶向的载体系统，将DNA转移至靶细胞核内进行表达。阳离子脂质体是用于基因治疗中最有前景的非病毒载体系统之一。阳离子脂质体/DNA复合物，也叫脂质复合物，是自组装纳米体系，能将DNA输送至多种类型的细胞中。在本研究中，我们制备了DOTAP/DOPE脂质体，对其与DNA的相互作用进行了理化表征，并研究了它们的体外转染效率。完成的工作包括以下几个方面：
　　 (1)薄膜超声法制备DOTAP/DOPE阳离子脂质体，考察确定了此工艺中水化时间与超声时间，并对制得的脂质体的粒径分散性、zeta电位分布、形貌以及初步物理稳定性进行表征。结果表明此制备工艺有较好的重复性。最后制得的阳离子脂质体平均粒径为128.6±4.6 nm，PDI为0.168±0.016，zeta电位为68.7±4.6 mV。在4 ℃或37 ℃贮存1个月后，其胶体稳定性较好。
　　 (2)制备了阳离子脂质体/DNA复合物，并考察了复合物的理化性质。粒径和电位测试、琼脂糖凝胶电泳的结果表明在N/P比为1.5以上时，DNA与阳离子脂质体形成了稳定且带正电的复合物。核酸酶酶切实验的结果表明复合物能保护DNA抵御核酸酶的降解。我们还对在生理离子强度下制备的复合物进行粒径和电位考察，结果表明在N/P比为3以上时，复合物带正电，且复合物颗粒有成簇聚集现象。此外，我们对动物实验要求的脂质复合物的制备进行摸索。
　　 (3)通过对CHO和NIH-3T3细胞的MTT细胞毒性和转染实验表明，复合物的细胞毒性较小；阳离子脂质体可以将DNA转移到两种细胞内得到有效的表达，转染的最佳N/P比为1.5到2。在CHO细胞中的转染效率比NIH-3T3细胞中高。
　　 综上所述，DOTAP/DOPE阳离子脂质体与DNA通过静电作用自组装形成的复合物，能有效介导基因的体外转染，为后续的研究打下良好的基础。