线粒体膜ATP敏感钾通道对人哮喘气道平滑肌细胞增殖和分泌的影响

摘要

目的：支气管哮喘是一种严重威胁人类健康的疾病，它的特征是慢性气道炎症，气道重构和气道高反应性（AHR），其中气道慢性炎症被认为是哮喘的本质。以往观点认为气道平滑肌细胞在这个病理过程中只是作为被动的靶细胞，在炎症介质的刺激下发生收缩和痉挛等反应。但是近年来的研究表明，气道平滑肌细胞不仅具有收缩功能，而且还能发生表型转化，在外界环境因素的刺激下从收缩型转化为增殖型的合成表型，合成分泌多种炎症因子和细胞因子，其中的具体机制十分复杂。在我们以往的研究中发现哮喘可引起大鼠气道平滑肌细胞的线粒体膜ATP敏感钾通道开放，促进气道平滑肌细胞增殖和表型转化，参与气道重构。但对于人支气管气道平滑肌细胞（HASMCs）方面的研究尚少见报道。故本实验拟在我们以往研究的基础上进一步探讨线粒体膜ATP敏感钾通道对人支气管气道平滑肌细胞增殖和分泌的影响，以期探索线粒体膜ATP敏感钾通道通道在支气管哮喘中的作用，为哮喘的防治寻找新的途径。
　　 方法：采用手术室肺叶切除患者的肺组织，分离培养正常人气道平滑肌，用哮喘患者血清体外制成被动致敏的人哮喘气道平滑肌细胞模型，取哮喘和正常HASMCs分为6组进行干预：正常对照组；正常+二氮嗪(Diazoxide，DE)（线粒体膜ATP敏感钾通道的选择性开放剂）组；正常+5-羟基癸酸盐(5-hydroxydecanoate，5-HD)（线粒体膜ATP 敏感钾通道的选择性阻断剂）组；哮喘对照组；哮喘+DE组；哮喘+5-HD组。利用罗丹明（R-123）荧光染色，激光共聚焦显微镜成像检测线粒体膜电位（△ψm），二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)荧光染色法检测细胞内活性氧（ROS）含量，MTT 法检测细胞增殖的情况，逆转录PCR检测气道平滑肌细胞中转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的表达。
　　 结果：①正常+DE组与正常对照组相比，活性氧产生增多，△ψm 去极化，R-123荧光强度增强，细胞增殖增多，TGF-β１的表达增高（P＜0.05），而正常+5-HD组与正常对照组相比，上述指标无显著差异；②与正常对照组相比，哮喘组活性氧产生增多，△ψm 去极化，R-123 荧光强度增强，细胞增殖增多，TGF-β１的表达增高，哮喘+DE组与哮喘对照组相比，上述指标增强，哮喘+5-HD组与哮喘对照组相比，上述指标降低（P＜0.05）。
　　 结论：哮喘可引起人气道平滑肌细胞线粒体膜ATP敏感钾通道开放，使活性氧的产生增多，引起△ψm 去极化，促进人气道平滑肌细胞的增殖和向合成表型的转化，同时TGF-β1的表达也相应增加，因而从多个方面参与气道重塑及哮喘的发生发展。

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材料与方法

结 果

讨 论

参 考 文 献

附 图

综述 气道平滑肌细胞在哮喘气道重构中的作用机制

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