胃肠道间质瘤伊马替尼继发耐药的机制研究

摘要

本文分两部分进行了阐述：
　　第一部分:p55PIK与 GIST伊马替尼耐药的相关性及功能研究
　　目的：探讨 p55PIK与 GIST伊马替尼耐药的关系,观察 p55PIK在 GIST伊马替尼耐药中的作用。
　　方法：(1)选取因腹腔巨大 GIST行手术切除,术后口服伊马替尼治疗,其间控制良好,后因继发耐药复发行第二次手术治疗的患者作为研究对象。通过免疫组织化学染色法检测 p55PIK在伊马替尼耐药前后的GIST组织中的表达差异;(2)将 GIST882细胞的培养基中持续加入伊马替尼培养,并逐渐增加药物剂量,诱导 GIST882伊马替尼耐药细胞系的形成,通过 Western Blot、实时荧光定量 PCR( Quantitative Realtime-PCR)等方法比较耐药前后细胞中p55PIK的表达;(3)将 GIST882细胞注射到裸鼠皮下成瘤(F0)后,持续伊马替尼灌胃治疗,三周后将肿瘤取出,种植于下一批裸鼠皮下,并继续伊马替尼灌胃治疗,成功构建了GIST伊马替尼继发耐药的动物模型(F6)。通过 Western Blot、实时荧光定量 PCR(Quantitative Realtime-PCR)等方法检测各代移植瘤中的p55PIK的表达水平;(4)在 GIST敏感细胞中高表达 p55PIK,通过 CCK8法观察 GIST882细胞对伊马替尼敏感性变化;在 GIST耐药细胞中低表达p55PIK,通过 CCK8法观察 GIST耐药细胞对伊马替尼的敏感性。
　　结果：(1)p55PIK在耐药后的组织﹑细胞及裸鼠移植瘤中的表达明显高于耐药前;(2)高表达 p55PIK能够降低伊马替尼对 GIST882细胞增殖的抑制作用,干扰 p55PIK可以增加伊马替尼对 GIST882-IR细胞增殖的抑制作用。
　　结论：p55PIK在伊马替尼继发耐药的GIST中高表达,高表达 p55PIK能促进 GIST882细胞耐药,而低表达 p55PIK能够增加 GIST882-IR对伊马替尼的敏感性。
　　第二部分:p55PIK在GIST伊马替尼耐药中的作用机制探讨
　　目的：探讨 p55PIK影响 GIST伊马替尼耐药的具体分子机制。
　　方法：(1),通过免疫组织化学方法检测耐药前后肿瘤组织中KIT的表达,观察 KIT的表达是否和p55PIK具有一致性;(2),通过 Western Blot方法在伊马替尼敏感的GIST细胞(GIST882)和伊马替尼耐药的GIST细胞(GIST882-IR)中检测 p55PIK﹑KIT的表达及NFκB的激活情况情况,证实三者间变化具有一致性;(3),在 GIST882细胞中高表达 p55PIK,通过 Western Blot方法检测 NFκB的激活及KIT的表达情况,在 GIST882-IR细胞中低表达 p55PIK,通过 Western Blot方法检测 NFκB的激活及KIT的表达情况;(4),在 GIST882细胞中加入 NFκB的抑制剂,再高表达 p55PIK,通过Western Blot方法检测 KIT的表达。
　　结果：(1),耐药后肿瘤组织中KIT的表达较耐药前明显增加,与 p55PIK的表达变化具有一致性;(2),GIST882细胞被诱导耐药后,耐药细胞中p55PIK的表达增加﹑NFκB通路激活﹑KIT的表达增加,具一致性;(3),高表达 p55PIK可以促进 NFκB的激活及KIT的表达,低表达 p55PIK可以抑制NFκB通路的激活及KIT的表达;(4), p55PIK促进 KIT基因转录是 NFκB依赖的。
　　结论：p55PIK可通过活化 NFκB影响 KIT的转录,从而促进 GIST对伊马替尼耐药。

目录

封面

声明

目录

前 言

参考文献

第一部分：p55PIK与GIST伊马替尼耐药的相关性及功能研究

中文摘要

英文摘要

前 言

1 材料与方法

2 结果

讨 论

参考文献

第二部分：p55PIK在GIST伊马替尼耐药中的作用机制探讨

中文摘要

英文摘要

前 言

1 材料与方法

2 结 果

3 讨 论

参考文献

全文总结

综 述

1. GIST中癌基因的突变

2. GIST的起源

3. GIST的药物治疗

4. TKIs类药物的耐药

5. 耐药GIST的治疗

6. 总结及展望

参考文献

实验方法及试剂配制

实验方法

试剂配制

致谢