RNAi对结肠癌SW480细胞核干细胞因子基因表达及细胞生物学行为的影响

摘要

目的：探求采用特异性小分子RNA干扰技术(即RNAi技术)作用于人结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因后,结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因mRNA和蛋白水平表达变化及相应的细胞增殖情况的变化。
　　方法：构建针对Nucleostemin基因的特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-timeQuantitativePCR和Westernblot检测Nucleostemin基因mRNA和蛋白的变化,采用MTT方法检测细胞的增殖情况的变化。
　　结果：与正常对照组N组相比较,Real-timePCR显示RNAi技术干扰SW480细胞48h后S1组﹑S2组NSmRNA表达明显下降(相对表达量分别为1.074±0.224﹑0.200±0.062﹑0.376±0.311,P<0.05);与正常对照组N组相比较,V组NSmRNA表达没有下降(相对表达量分别为1.074±0.224﹑1.111±0.247,P>0.05);与V组相比较,RNAi技术干扰SW480细胞后S1组﹑S2组NS的mRNA表达明显下降(相对表达量分别为1.074±0.224﹑0.200±0.062﹑0.376±0.311,P<0.05)。Westernblot显示,和N组相比较,转染细胞48h后S1组﹑S2组NS蛋白表达明显下降(相对表达量分别为1.901±0.8177﹑1.070±0.368﹑1.003±0.313,P<0.05);和V组相比较,转染细胞48h后S1组﹑S2组NS蛋白表达亦明显下降(相对表达量分别为2.035±0.665﹑1.069±0.368﹑1.003±0.313,P<0.05);和N组比较,V组NS蛋白表达没有下降(相对表达量分别为1.901±0.817﹑2.035±0.665﹑P>0.05)。MTT显示转染细胞24h﹑48h﹑72h后,和N组比较S1组﹑S2组各自细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);和V组比较S1组﹑S2组细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);N组和V组比较没有差异(P>0.05)。
　　结论：通过特异性小分子RNA干扰NS基因后,SW480细胞的增殖受到抑制。

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