可溶性HLA-G二聚体在“人-鼠”异种移植物抗宿主病模型中的作用研究

摘要

HLA-G是非经典的HLAI类分子之一,其有限的基因多态性及限制性的组织分布,提示它是一种诱导免疫耐受的分子。临床上免疫抑制剂的大量使用,在缓解移植排斥反应的同时也抑制了机体的免疫系统,使患者处于罹患感染的风险之中,因此,诱导同种异体免疫耐受成为了目前亟待解决的问题。大量体外研究资料显示,HLA-G可以通过与抑制性受体,如ILT-2/4等结合,诱导T、B、NK、DC、巨噬细胞等免疫细胞的免疫耐受。临床移植研究也显示,HLA-G阳性受者较HLA-G阴性的受者,其急性排斥期短,慢性排斥发生率也低。研究显示,HLA-G二聚体在体外能有效抑制同种T细胞的应答作用,但其在体内的研究相对较少。本研究利用混合淋巴细胞培养模型,在体外研究了HLA-G二聚体对同种反应性T细胞的作用;利用“人-鼠”异种GVHD模型,初步探讨了HLA-G二聚体在体内的作用;同时我们还利用“人-鼠”异种GVHD模型,探讨了雷帕霉素在该模型中的作用。论文的主要内容与结果如下:
　　一、可溶性HLA-G二聚体可诱导同种T细胞耐受
　　为了进一步研究可溶性HLA-G二聚体抑制同种反应性T细胞的作用,本研究选用Tyr368-376肽,将其加载至T2细胞表面,利用加载了Tyr肽的T2细胞与HLA-A2阴性的淋巴细胞混合培养,这个过程中加入可溶性HLA-G二聚体进行干预,混合培养七天之后收集细胞,通过流式细胞学技术进行检测和分析。结果显示:可溶性HLA-G二聚体可抑制T细胞活化,抑制同种CD8+细胞分泌IFN-γ,促进同种CD8+细胞分泌IL-4,但对同种CD8+细胞分泌TGF-β无影响。
　　二、可溶性HLA-G二聚体不能改善模型鼠的GVHR症状和延长其生存时间
　　基于可溶性HLA-G二聚体在体外能诱导同种T细胞耐受,为了进一步丰富可溶性HLA-G二聚体在体内相关数据,我们建立了“人-鼠”异种GVHD模型,探讨其在体内的作用。结果显示:可溶性HLA-G二聚体不能改善模型鼠的GVHR症状,也不能延长其生存时间。随后我们发现在异种混合培养中,第七天时CD56+有明显的增殖,且在加入可溶性HLA-G二聚体之后这一增殖更加明显,但CD3+和CD14+细胞没有观察到明显增殖;单用CD56+细胞也不能导致异种GVHR的发生,但去除PBMC中的CD56+细胞后,模型鼠的生存时间得到了显著延长。综合上述实验结果,我们可以确定,CD56+细胞在异种混合培养中起关键作用,是异种GVHR发生的导火索。
　　三、雷帕霉素改善模型鼠GVHR症状伴随MDSCs的增多
　　mTOR是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,为磷脂酰肌醇激酶相关激酶蛋白质家族成员之一,是细胞生长及发育中的一种关键激酶,是雷帕霉素的靶向分子。雷帕霉素是由吸水链霉菌生产的大环内酯类,最初获得关注是其具有免疫抑制作用。在我们的研究中,我们利用“人-鼠”异种GVHD模型以及与GM-CSF联用,分别从体内和体外对雷帕霉素进行了研究。结果显示:在体内,雷帕霉素可以改善模型鼠GVHR症状并伴随MDSCs的增多;在体外,雷帕霉素与GM-CSF联用,可以诱导PBMC中MDSCs的增多。

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

I. 材料与试剂

一、 细胞株及血标本

二、 抗原肽

三、 生化试剂及材料

四、 仪器设备

II.方法

一、 重组可溶性HLA-G二聚体的浓缩纯化与大量制备

二、HLA-G二聚体对同种反应性T细胞耐受的影响

三、HLA-G二聚体在“人-鼠”异种GVHD模型中的作用

四、“人-鼠”异种混合培养

五、CD56+细胞在“人-鼠”异种GVHD模型中的作用

六、雷帕霉素对PBMC中MDSCs的作用

结果

一、 PEG浓缩法可获得较高纯度、较高含量的HLA-G二聚体并保持其抑制效应

二、 可溶性HLA-G二聚体可诱导同种T细胞耐受

三、 可溶性HLA-G二聚体不能改善模型鼠的X-GVHR症状和延长其生存时间

四、 可溶性HLA-G二聚体可以促进异种混培中人CD56+细胞的增殖

五、 CD56+细胞充当X-GVHR激发扳机作用

六、 雷帕霉素改善模型鼠GVHR症状伴随MDSCs的增多

七、 雷帕霉素在体外可以诱导人PBMC中MDSCs的增多

讨论

参考文献

综述

附录 1

附录 2

致谢