法舒地尔抑制心肌炎症和凋亡改善间歇低氧诱导心肌重构的研究

摘要

目的：慢性间歇低氧作为阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的核心病理生理机制，在其相关的心血管疾病包括心肌重构的发生发展过程中起关键作用。RhoA/Rho激酶（ROCK）信号转导通路可参与多种动物模型诱导的心肌重构，但其在慢性间歇低氧所致心肌重构的病理生理过程中是否发挥作用，尚未见相关研究。本实验的目的是探究RhoA/ROCK信号通路是否参与慢性间歇低氧诱导的大鼠心肌重构，同时用药物法舒地尔（F），一种特异性ROCK抑制剂进行干预，从而对RhoA/ROCK信号通路参与慢性间歇低氧诱导大鼠心肌重构的可能机制进行初步探讨。
　　方法：雄性SD大鼠（180-200g）随机分为4组，每组8只：常氧对照组、常氧对照+F组、慢性间歇低氧组、慢性间歇低氧+F组，造模时间6周。测大鼠心脏重量与大鼠体重并计算其比值计算心肌肥大指数，苏木精-伊红（HE）染色法评估大鼠心肌肥大情况并计算心肌细胞平均直径，马森三色（Masson）染色法评估心肌细胞间质纤维化情况，TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡情况；透射电镜观察各组大鼠心肌超微结构。实时荧光定量 PCR检测炎症相关基因IL-6、TNF-α、MCP-1、TGF-β1及NF-κB p65mRNA表达水平，Western Blot检测大鼠心肌组织细胞中RhoA/ROCK信号通路相关蛋白RhoA、MYPT-1、p-MYPT-1（Thr853），凋亡相关蛋白Bax、Cleaved-caspase3及胞浆和胞核内NF-κB p65的蛋白表达。
　　结果：与常氧对照组相比，慢性间歇低氧组心肌肥大指数增加（P<0.01），心肌组织中平均心肌细胞直径增加（P<0.01），心肌纤维化程度增加（P<0.01），心肌细胞凋亡指数增加（P<0.01）；与此同时，炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1、TGF-β1mRNA表达水平升高（P<0.01），RhoA/ROCK信号通路相关蛋白RhoA、MYPT-1、p-MYPT-1（Thr853），凋亡相关蛋白 Bax、Cleaved-caspase3的蛋白表达水平明显增高（P<0.01）；NF-κB p65胞浆蛋白水平降低、胞核水平升高（P<0.01）。法舒地尔药物干预6周后，慢性间歇低氧+F组大鼠的心肌肥大指数、心肌纤维化程度、心肌凋亡程度、RhoA/ROCK通路相关蛋白的表达水平较慢性间歇低氧组明显下降（P<0.01），NF-κB p65胞浆蛋白水平升高，胞核水平降低（P<0.01）；心肌细胞平均直径减小（P<0.05），炎症细胞因子、NF-κB p65 mRNA表达水平及凋亡相关蛋白表达水平下降（P<0.05；P<0.01）。
　　结论：RhoA/ROCK信号通路参与了慢性间歇低氧诱导心肌重构的发生发展过程，NF-κB相关的心肌炎症、心肌细胞凋亡可能是RhoA/ROCK信号转导通路参与大鼠左室心肌重构的重要途径。法舒地尔作为ROCK特异性抑制剂，可通过抑制心肌炎症和心肌凋亡，改善慢性间歇低氧诱导的大鼠左室心肌重构。

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英文缩略词表

中文摘要

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前言

材料和方法

一、实验材料

二、实验方法

三、统计学处理

实验结果

一、各组大鼠心肌组织学的改变

二、各组大鼠左室心肌组织促炎症因子 IL-6，TNF-α，MCP-1 和 TGF-β1水平的测定

三、各组大鼠左室心肌RhoA/Rho激酶(ROCK)活性相关蛋白RhoA、MYPT-1和 p-MYPT-1的表达

四、各组大鼠心肌NF-κB p65活性的测定

五、各组大鼠心肌凋亡情况的测定

五、各组大鼠心肌中凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase3的测定

讨论

实验主要结论

附图

综述: 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征炎症反应的研究进展

附录读研期间撰写和发表的文章

致谢