体外模拟肿瘤微环境中免疫细胞和肿瘤细胞的相互作用过程

摘要

本人所在课题组的前期研究发现，四聚体红色荧光蛋白（tfRFP）可同时诱导机体产生体液免疫和细胞免疫应答，是一种性能优良的荧光模型抗原。在 tfRFP免疫小鼠体内接种表达tfRFP的黑色素瘤细胞（tfRFP-B16）后，肿瘤微环境内大量的免疫细胞募集，肿瘤细胞被破坏，产生大量的tfRFP阳性微粒，肿瘤生长被控制。这种产生微粒的现象在PBS处理的对照组小鼠体内并未出现，很可能在肿瘤的免疫监视与控制中有着独特的意义。在这个过程中，免疫细胞如何作用于肿瘤细胞诱导其死亡并产生大量微粒，值得我们进一步研究。对此，我们推测是免疫细胞通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）引起细胞的死亡而诱导了这种微粒的释放。
　　本论文是为配合课题组对tfRFP诱导的特异性免疫应答活体成像研究，在体外实验条件下模拟体内环境，确证诱导肿瘤细胞产生微粒的必要条件，以印证活体观察到的现象和推测的诱因。主要包括以下方面：
　　（1）免疫细胞攻击肿瘤细胞产生的微粒展示及其体外分离。以我们课题组已建立荧光蛋白抗原模型体系为研究对象，切片成像观察 tfRFP蛋白免疫小鼠的肿瘤组织内肿瘤细胞情况，同时尝试体外分离微粒，相对于PBS组小鼠肿瘤组织分离出的肿瘤细胞，免疫小鼠的肿瘤组织未分离出完整的细胞，而是包裹着很多微粒的团块。
　　（2）免疫细胞攻击tfRFP-B16细胞产生微粒的体外成像及机理研究。tfRFP-B16细胞、小鼠血清和小鼠骨髓细胞共孵育后，转盘共聚焦成像观察 tfRFP-B16细胞形态变化以及MTS检测tfRFP-B16肿瘤细胞的存活率，实验结果显示，只有当免疫小鼠血清和小鼠骨髓细胞同时作用于 tfRFP-B16细胞时，才能诱导肿瘤细胞的死亡并产生微粒。由此证明，ADCC是介导tfRFP免疫小鼠体内tfRFP-B16肿瘤细胞死亡和微粒释放的重要作用机制之一。

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1 绪论

1.1 微粒简介

1.1.1 微粒的来源

1.1.2 微粒的产生

1.1.3 微粒的性质

1.2 ADCC简介

1.2.1 ADCC的定义

1.2.2 ADCC的触发分子Fc受体

1.2.3 ADCC的效应细胞

1.3 微粒与肿瘤之间的联系

1.4 本文的选题背景及主要研究内容

1.4.1 选题背景

1.4.2 本文主要研究内容

2 免疫细胞攻击肿瘤细胞产生的微粒展示及其体外分离

2.1 引言

2.2 实验材料和方法

2.2.1 实验材料

2.2.2 实验仪器

2.2.3 实验方法

2.3 实验结果

2.3.1 tfRFP蛋白免疫后荷瘤鼠肿瘤组织内部出现大量微颗粒

2.3.2 tfRFP蛋白免疫后荷瘤鼠肿瘤组织内tfRFP-B16细胞分离

2.4 本章小结

3 免疫细胞攻击tfRFP-B16产生微粒的体外成像及机理研究

3.1 引言

3.2实验材料和方法

3.2.1 实验材料

3.2.2 实验仪器

3.2.3 实验方法

3.3 实验结果

3.3.1 检测血清中tfRFP特异性抗体滴度

3.3.2 转盘共聚焦成像观察抗体依赖的免疫细胞介导的细胞毒作用

3.3.3 MTS检测免疫细胞介导的细胞毒作用对tfRFP-B16细胞的杀伤作用

3.3.4 小鼠骨髓细胞的流式分析

3.3.5 成像观察抗体依赖的中性粒细胞以及单核细胞介导的细胞毒作用

3.4 本章小结

4 结论与展望

4.1 本文的研究内容和结论

4.2 本文的创新点和展望

致谢

参考文献