HPLC对细辛含药血清中甲基丁香酚和马兜铃酸A含量的测定

摘要

目的:用高效液相色谱法(HPLC)对细辛含药血清中甲基丁香酚和马兜铃酸A(AAⅠ)的含量进行测定，旨在为临床安全有效地使用细辛和客观评价细辛提供实验依据，并建立起测定细辛含药血清中甲基丁香酚和AAⅠ的含量的HPLC方法。
　　 方法:
　　 1.细辛含药血清的制备
　　 将北细辛根茎置于电热干燥箱中干燥1h(温度40℃)，然后经球磨粉碎机研磨粉碎，过5号筛(80目)，即得细辛散剂，置于阴凉处密封保存备用。将成年SD大鼠随机分成两组，即空白血清组和含药血清组。其中细辛含药血清组的细辛用药剂量为1.78g/kg；空白血清组给予等量的生理盐水。每天给药2次，连续8天。在最后一次给药2h后对大鼠进行眼眶采血。将所采血液在室温下静置30min后取上清液，3000rpm离心20min，分离血清，取血清2ml，滴加甲醇8ml，混匀，2500rpm离心10min，取上清液，水浴65℃挥去甲醇，余液浓缩，过0.22μm微孔滤膜滤过除菌，分装，-20℃条件下保存备用。
　　 2.HPLC对细辛含药血清中甲基丁香酚含量的测定
　　 用HPLC法，仪器为戴安高效液相色谱仪：P680型输液泵、在线脱水机、手动进样器、TCC-100柱温箱、PDA-100二极管阵列检测器、chromel eon色谱工作站。条件：色谱柱为DiamonTM0DS-G18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-水-0.025mol/1磷酸(78∶21∶1)；柱温为室温；检测波长为250nm；流速为1ml/min；进样20μl，测定细辛含药血清中甲基丁香酚的含量。
　　 3.HPLC对细辛含药血清中AAⅠ含量的测定
　　 用HPLC法，仪器为戴安高效液相色谱仪：P680型输液泵、在线脱水机、手动进样器、TCC-100柱温箱、PDA-100二极管阵列检测器、chromeleon色谱工作站。条件：色谱柱为DiamonTM0DS-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-水-醋酸(72∶27∶1)；柱温为室温；检测波长为390nm；流速为1m1/min；进样20μl，测定细辛含药血清中AAⅠ的含量。
　　 结果:细辛含药血清中甲基丁香酚的含量为0.0032mg/m1。细辛含药血清中AAⅠ的含量低于检测限。
　　 结论:
　　 1.初步开展了HPLC法对细辛含药血清中甲基丁香酚和AAⅠ的含量测定；
　　 2.建立了测定细辛含药血清中甲基丁香酚和AAⅠ的HPLC方法；
　　 3.细辛含药血清中含有一定血药浓度的甲基丁香酚，不含AAⅠ。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

实验一 细辛含药血清及空白血清的制备

1 材料和方法

2 基本评价

3 讨论

实验二 HPLC对细辛含药血清中甲基丁香酚和AAⅠ的含量测定

1 HPLC法对细辛含药血清中甲基丁香酚的含量测定

2 HPLC法对细辛含药血清中AAⅠ的含量测定

讨论

1 开展中药血药浓度测定的必要性

2 HPLC测定细辛含药血清中甲基丁香酚和AAⅠ的方法探讨

3 指标的选择

4.小结和展望

参考文献

文献综述:细辛中特征性成分和马兜铃酸A含量测定的研究概况

致谢