Toll样受体9和核因子-κBp65在大鼠溃疡性结肠炎模型结肠组织中的表达及其相关性的研究

摘要

目的：观察Toll样受体9（toll-like receptor，TLR9）、核因子-κBp65（Nuclear Factor-κBp65，NF-κBp65）在溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）大鼠模型结肠粘膜中的表达情况，探讨二者在UC发病机制中的作用及其相关性。
　　方法：选用清洁级成年Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，雌雄各半，随机抽取20只作为模型组，应用复合法(2，4-二硝基氯苯+乙酸)制备细胞免疫反应性UC大鼠模型，另外20只作为对照组。造模成功后，观察和评估结肠黏膜的大体形态和组织学变化；应用免疫组化 Elivision法检测模型组和正常对照组大鼠结肠粘膜中 TLR9和 NF-κBp65表达；并分析其与组织学分级关系。实验数据应用SPSS14.0软件进行统计学处理，计数资料采用卡方检验和Spearman等级相关分析，计量资料采用单因素方差分析中的SNK-q检验、t检验，以P<0.05为检验显著性标准。
　　结果：1、模型组20只大鼠于造模完成后5～10天，均开始出现腹泻、粪便恶臭、粪便稀溏、血便或粘液脓血便等UC常见症状；标本大体观可见肠粘膜充血、水肿、糜烂、坏死、肠壁增厚、溃疡形成；组织学检查证实均符合UC诊断标准，造模成功率为100％；且模型组大鼠的大体形态及组织学评分明显高于正常对照组，两组差异有显著的统计学意义（P<0.01）。2、模型组和正常对照组大鼠结肠粘膜中TLR9阳性表达率分别为90％（18/20）和35％（7/20），模型组大鼠结肠粘膜TLR9表达明显高于正常对照组，两者差异有显著的统计学意义（P<0.01）。3、TLR9在UC组大鼠结肠粘膜中组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的表达分别为13.75±9.78、49.33±17.76、82.4±29.46；Ⅰ级与Ⅲ级UC大鼠相比P<0.01，且Ⅱ级与Ⅰ级、Ⅲ级UC大鼠相比P<0.05。4、NF-κBp65在模型组大鼠结肠粘膜中阳性表达率为85％（17/20），在正常对照组大鼠结肠粘膜中阳性表达率为25％（5/20），两者差异有显著的统计学意义（P<0.01）。5、UC组大鼠结肠粘膜中组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级三组中NF-κBp65的表达分别为8.75±7.18、41.83±11.99、68.4±26.76；Ⅰ级与Ⅲ级UC大鼠相比P<0.01，且Ⅱ级与Ⅰ级、Ⅲ级UC大鼠相比P<0.05。6、UC大鼠结肠粘膜中TLR9表达与NF-κBp65表达呈显著正相关（rs=0.971，P<0.01）。
　　结论：1、UC大鼠结肠粘膜中 TLR9、NF-κBp65表达明显升高，且与疾病的组织学分级呈正相关，提示其可能与UC发生、发展有关。2、TLR9和NF-κBp65在 UC结肠粘膜中的表达密切相关，呈显著正相关，TLR9可能促进 NF-κBp65的表达。

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前言

材料和方法

1.实验材料

2.模型的建立与分组

3.标本的取样与保存

4.UC组织学诊断及分级标准

6.结果判定

7.统计学分析

结果

1.大鼠的一般情况、结肠组织大体形态、组织学观察

2.造模成功率

3.HE染色病理表现

4. TLR9和NF-κBp65的表达

5.UC大鼠结肠粘膜中TLR9表达和NF-κBp65表达的关系

附图

讨论

1. TLR9在UC大鼠结肠粘膜中的表达及意义

2. NF-κBp65在UC大鼠结肠粘膜中的表达及意义

3. UC大鼠结肠粘膜中TLR9及NF-κB p65表达的相互关系及其相关性

结论

参考文献

致谢

附录A英文缩略词表

附录B试剂配制

附录C ：个人简历

附录D 综述: Toll样受体9与溃疡性结肠炎