李氏溶血素单克隆抗体制备及检测李氏溶血素的初步探索

摘要

本文对李氏溶血素单克隆抗体制备及检测李氏溶血素进行了探讨。本研究以原核表达系统pGEX-6P-hly/BL-21表达的重组LLO，经纯化作为免疫抗原，免疫BALB/c小鼠，以LMO-0586于BHI培养基中分泌的天然LLO为筛选抗原，检测抗LLO单克隆抗体。经过细胞融合，建立间接ELISA方法，采用有限稀释法，经三次亚克隆，获得6株稳定分泌抗LLO单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为Ⅰ F5、ⅡC4、ⅡE5、ⅢG7、ⅣB7、ⅣE9。

目录

文摘

英文文摘

声明

1前言

1.1 LMO的生物学特性

1.1.1形态特性

1.1.2培养和生化特性

1.1.3对理化因素的抵抗力

1.1.4致病机理与致病的物质基础

1.2李氏溶血素研究进展

1.3检测方法研究进展

1.3.1传统的检测方法

1.3.2免疫学检测方法

1.3.3分子生物学检测

1.4应用单克隆抗体的检测方法研究进展

1.4.1以李斯特氏菌属特异性单克隆抗体建立的酶免疫检测技术

1.4.2以针对LMO和无害李斯特氏菌共同表位的单抗建立的检测方法

1.4.3以抗LMO的特异单克隆抗体为试剂建立的快速检测方法

1.5课题的研究目的与意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1菌种与细胞

2.1.2实验动物

2.1.3主要试剂与材料

2.1.4细菌培养基、细胞培养溶液配制方法

2.1.5主要仪器设备

2.2实验方法

2.2.1 LLO的表达与纯化

2.2.2单克隆抗体的制备

2.2.3杂交瘤细胞的鉴定

2.2.4单克隆抗体的鉴定

2.2.5阻断ELISA检测LMO的探索

3结果与分析

3.1 LLO的表达与纯化

3.1.1表达结果

3.1.2切胶纯化结果

3.2细胞融合与筛选结果

3.2.1天然LLO的提取结果

3.2.2天然LLO鉴定结果

3.2.3 ELISA筛选方法建立的结果

3.2.4细胞融合率

3.2.5阳性杂交瘤细胞的筛选结果

3.3单克隆抗体鉴定结果

3.3.1单克隆抗体亚类鉴定结果

3.3.2 Western blot检测结果

3.3.3单抗特异性鉴定结果

3.3.4杂交瘤细胞培养上清效价测定结果

3.3.5腹水单抗效价测定结果

3.4杂交瘤细胞鉴定结果

3.4.1杂交瘤细胞染色体数鉴定

3.4.2杂交瘤分秘抗体稳定性鉴定结果

3.5阻断ELISA检测LMO结果

4讨论

4.1免疫原和检测原的选择

4.2关于抗LLO单克隆抗体的特性

4.3应用单抗检测LMO的探索

5结论

致谢

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文