IBDV感染SPF雏鸡局部黏膜TGFβ1mRNA表达及免疫功能的变化

摘要

以21日龄SPF雏鸡为研究对象，应用间接ELISA、免疫酶组织化学法、酸性α-醋酸萘酯酶染色法和实时荧光定量PCR技术较系统地研究了SPF雏鸡感染IBDV后，其呼吸道和消化道局部黏膜组织（哈德尔腺、盲肠扁桃体、十二指肠和回肠派伊尔结）IgA、IgM、IgG生成细胞和T淋巴细胞数量及TGF-β1 mRNA表达以及局部体液（泪液、气管液、肠液、胆汁）中免疫球蛋白IgA、IgM、IgG含量的动态变化，旨在全面系统地阐述SPF雏鸡感染IBDV后，其局部黏膜免疫的变化，为防治IBD提供科学依据。研究结果如下:
　　 1)21日龄SPF雏鸡感染IBDV后，其泪液、气管液、肠液和胆汁中IgA、IgM、IgG含量以及哈德尔腺、盲肠扁桃体、十二指肠和回肠派伊尔结中IgA、IgM、IgG生成细胞数量均不同程度地低于对照雏鸡。其中，病毒感染雏鸡泪液IgA和IgG以及胆汁IgA、IgM含量在病毒感染后3～7天显著或极显著低于对照雏鸡(P＜0.01或P＜0.05);而泪液IgM、胆汁IgG以及气管液和肠液中上述3种免疫球蛋白含量在病毒感染后3～5天明显降低(P＜0.01或P＜0.05)。同时病毒感染雏鸡哈德尔腺IgA、IgM生成细胞和十二指肠派伊尔结IgM、IgG生成细胞数量在病毒感染后5～14天较对照雏鸡显著或极显著减少(P＜0.01或P＜0.05)，而哈德尔腺IgG生成细胞、十二指肠派伊尔结IgA生成细胞以及盲肠扁桃体和回肠派伊尔结的上述3种抗体生成细胞数量均在病毒感染后5～7天较对照雏鸡显著或极显著降低(P＜0.01或P＜0.05)，表明SPF雏鸡感染IBDV后，其消化道和呼吸道局部黏膜免疫的体液免疫受到明显抑制。
　　 2)21日龄SPF雏鸡感染IBDV后，其哈德尔腺、盲肠扁桃体、十二指肠和回肠派伊尔结中T淋巴细胞数量不同程度地低于对照雏鸡，并于病毒感染后5～14天显著或极显著降低(P＜0.01或P＜0.05)，表明SPF雏鸡感染IBDV后，其消化道和呼吸道局部黏膜免疫组织的细胞免疫也受到一定程度的抑制。
　　 3)21日龄SPF雏鸡感染IBDV后，其哈德尔腺和盲肠扁桃体的TGF-β1mRNA表达均不同程度地高于对照雏鸡。其中，哈德尔腺和盲肠扁桃体TGF-β1 mRNA表达量分别于病毒感染后3～28天和3～14天极显著高于对照雏鸡(P＜0.01)，二者表达量均在病毒感染后第7天达到峰值，而后逐渐下降，表明雏鸡感染IBDV后，其消化道和呼吸道局部黏膜免疫组织的TGF-β1 mRNA表达被激活，其表达量上升与IBDV感染雏鸡早期免疫功能抑制密切相关。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 传染性法氏囊病及研究进展

1．1．1 传染性法氏囊病病原学

1．1．2 传染性法氏囊病流行病学和临诊症状

1．1．3 传染性法氏囊病免疫抑制作用

1．1．4 传染性法氏囊病的预防

1．2 家禽黏膜免疫研究进展

1．2．1 家禽黏膜免疫系统的组成

1．2．2 家禽黏膜相关淋巴组织及其作用

1．2．3 家禽黏膜免疫系统功能

1．2．4 家禽与哺乳动物黏膜免疫系统的主要区别

1．3 转化生长因子-β1研究进展

1．3．1 TGF-β1的免疫抑制作用

1．3．2 TGF-β1与免疫疾病

1．4 本项研究的目的与意义

2 材料和方法

2．1 试验材料

2．1．1 试验动物

2．1．2 IBD毒株

2．1．3 主要生物制剂和化学试剂

2．1．4 主要仪器设备

2．2 试验方法

2．2．1 试验动物分组及其处理

2．2．2 被检材料采取

2．2．3 检测指标与方法

2．3 数据处理

3 结果与分析

3．1 IBDV感染SPF雏鸡局部黏膜体液免疫变化

3．1．1 IBDV感染SPF雏鸡局部体液免疫球蛋白含量变化

3．1．2 IBDV感染SPF雏鸡局部黏膜组织抗体生成细胞数量的变化

3．2 IBDV感染SPF雏鸡局部黏膜的细胞免疫变化

3．2．1 IBDV感染SPF雏鸡哈德尔腺和盲肠扁桃体T淋巴细胞数量变化

3．2．2 IBDV感染SPF雏鸡肠派伊尔结T淋巴细胞数量变化

3．3 雏鸡TGF-β1 mRNA表达Real Time PCR检测方法的建立及应用

3．3．1 总RNA提取

3．3．2 TGF-β1和β-actin目的片段RT-PCR扩增电泳结果

3．3．3 局部黏膜组织TGF-β1和β-actin mRNA表达

3．3．4 重组质粒PCR鉴定

3．3．5 TGF-β1和β-actin基因扩增片段序列测定

3．3．6 标准曲线的绘制

3．3．7 雏鸡局部黏膜组织TGF-β1 mRNA表达检测

3．4 IBDV感染SPF雏鸡局部黏膜免疫组织TGF-β1 mRNA表达变化

4 讨论

4．1 IBDV感染对SPF雏鸡局部黏膜体液免疫的影响

4．2 IBDV感染对SPF雏鸡局部黏膜细胞免疫的影响

4．3 IBDV感染对SPF雏鸡局部黏膜免疫组织TGF-β1 mRNA表达的影响

5 结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士期间发表的学术文章